人神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）ELISA Kit|说明书

 人神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）ELISA Kit

产品名称：人神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）ELISA Kit

别名：人神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）ELISA检测试剂盒；人神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）ELISA酶免试剂盒；人神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）ELISA试剂盒

英文名称：Human Ninjurin-2（NINJ2） ELISA kit

产品类型：ELISA Kit

种属：Human

待测物名称： ninjurin 2

缩写：NINJ2

适合样本： serum, plasma, tissue homogenates

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。

2.批内与批间应分别小于9%和15%

检测范围：                                             

30pg/ml  -1800pg/ml 

保存温度：4°C（三个月内使用）；-20°C（三个月后使用）

有效期：4°C（保存6个月）；-20°C（保存一年）

注意：本试剂盒仅供科研使用

目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）含量。

实验原理：

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）水平。用纯化的人神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入神经损伤诱导蛋白2（NINJ2），再与HRP标记的神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）浓度。

试剂盒组成：

操作步骤

1.       标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800pg/ml， 1200pg/ml，600pg/ml，300pg/ml， 150pg/ml）。

2.       加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.       温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.       配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5.       洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.       加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.       温育：操作同3。

8.       洗涤：操作同5。

9.       显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.    终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.    测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标     

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释      倍数，即为样品的实际浓度。                 

  注意事项：

1．  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．  浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．  各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．  请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．  底物请避光保存。

7．  严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．  所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．  本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。