人抑制素B（INHB）ELISA试剂盒Kit|说明书

 人抑制素B（INHB）ELISA试剂盒Kit|说明书

产品名称：人抑制素B（INHB）ELISA试剂盒

别名：人抑制素B（INHB）ELISA检测试剂盒；人抑制素B（INHB）ELISA酶免试剂盒；人抑制素B（INHB）ELISA Kit

英文名称：Human Inhibin B （INHB） ELISA Kit

品牌：BioSwamp

货号：HM10649

规格：96T

目的：本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中抑制素B（INHB）含量。

有效期：6个月

保存温度：2-8℃

人抑制素B（INHB）ELISA试剂盒Kit|说明书

使用目的：

本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中抑制素B（INHB）的含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人抑制素B（INHB）水平。用纯化的人抑制素B（INHB）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抑制素B（INHB），再与HRP标记的抑制素B（INHB）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的抑制素B（INHB）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抑制素B（INHB）浓度。

注意事项：

l           本试剂盒仅用于科研，不得用于医学诊断。

l           使用试剂盒前，请仔细阅读说明书，以试剂盒内的说明书为准，请务必理解说明书内容。

l           酶标包被板属于可拆型，开封后如未用完，板条应装入铝箔袋密封并2-8°C保存。

l           加样样本和试剂应尽快完成。

l           避免实验过程中酶标板干燥；清洗后尽快加试剂。

l           实验开始，所有试剂应平衡到室温 （21-26°C） 后方可进行。温度会影响吸光度值，但不影响样本值。

l           切忌用口加样，以免试剂和样本粘到皮肤和粘膜上。

l           不要在处理样本或试剂的区域抽烟、吃东西、喝酒或化妆。

l           操作时带一次性手套，微生物的污染会影响实验结果的正确性。

l           操作应按照国家规定的安全条列进行。

l           过期的试剂盒切勿再使用。

l           TMB 底物对皮肤有刺激性，不慎入眼，立即用大量水冲洗，皮肤上不慎接触到也应立即用肥皂，并用大量的水冲洗。试验中被污染的物品在下次使用前应尽快清洗。

试剂盒组成：

1.说明书                             1份

2.封板膜                             2张

3.酶标包被板                       12孔×8条

4.标准   2560pg/ml                 0.6ml×1 瓶

5.标准品稀释液                     2ml×1 瓶

6.生物素标记的抗INHB抗体         1.5ml×1瓶

7.显色剂A液                        6ml×1瓶

8.显色剂B液                        6ml×1瓶

9.终止液                           6ml×1瓶

10.酶标试剂                        6ml×1瓶

11. 30倍浓缩洗涤液                 20ml×1瓶

需要而未提供的试剂和器材：

l           吸光度值在450nm波长下检测的酶标仪。

l           1-2ml的加样器。

l           100 ml和1L的量筒。

l           吸水纸。

l           37°C 恒温箱。

l           蒸馏水或去离子水。

l           数据分析和绘图软件，图纸。

l           标准和样品稀释的试管。

储存条件：

u           有效期内的试剂如开封后未用完，请2-8°C 保存。

u           过期的试剂请不要用，打开后的试剂2-8°C 保存。

u           酶标包被板必须2-8°C 保存，如有未用完的酶标包被板，打开的铝箔袋须密封并2-8°C 保存。

u           开封后的试剂盒2-8°C只能保存8周。

试剂准备：

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

样本处理及要求：

1.    血清-用采血管收集血液，室温血液自然凝固30分钟，1000 xg离心15分钟左右，收集上清，尽早进行实验，或者分装后-20°C 或 -80°C 保存。

2.    血浆-收集好的血浆根据要求选择EDTA或者柠檬酸钠作为抗凝剂，2-8°C 1000 xg离心15分钟左右，30分钟内收集好，-20°C 或 -80°C 保存，避免反复冻融。

3.    细胞上清及相关液体-收集好的样本离心后应尽快实验，或者分装后-20°C 或 -80°C 保存，避免反复冻融。

操作步骤：

u           注意事项：

l           所有试剂和样本使用前必须在室温下平衡，混匀试剂时不应起泡沫。

l           一旦实验开始，各操作步骤都应尽快完成。

l           避免重复使用手中的吸头和试管，以免交叉污染。

l           一般情况，酶的反应与时间和温度成正比。

u           操作步骤：

1.       标准品的稀释：准备小试管6只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0号标准品。稀释后各管浓度分别是：1280pg/ml,640 pg/ml,320 pg/ml,160 pg/ml,80 pg/ml,0 pg/ml。

在酶标包被板上设标准品孔，依次加入不同浓度的标准品50ul（建议每个浓度做2个平行孔）。

2.       加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品、酶标试剂及生物素标记的抗INHB抗体，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl，然后再加生物素标记的INHB抗体10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.       温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.       配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.       洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.       加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.       温育：操作同3。

8.       洗涤：操作同5。

9.       显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.  终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.  测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行

实验结果计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，即为样品的实际浓度。