CL-11细胞 操作说明书

                              CL-11细胞 操作说明书

产品名称：CL-11细胞

中文名称：人结肠癌细胞

细胞形态：上皮样，贴壁细胞

传代比例：1:2~1:3

培养体系：DMEM/F12 培养基 推荐HAKATA A19010；20%胎牛血清 推荐HAKATA HN-FBS-500；细胞培养

未加双抗，客户可视实际情况选择添加

STR：Amelogenin X,Y CSF1PO 11 D2S1338 17,19 D3S1358 15,16 D5S818 12 D7S820 9(DSMZ)D8S1179 14D13S317 13,14 D16S539 11,13 D18S51 14 D19S433 14 D21S11 31,32.2 FGA 22,23 Penta

D 9,13Penta E 10,11 TH01 6,9 TPOX 8 vWA 16,17

冻存条件：冻存液：90%FBS，DMSO 10%,或使用非程序冻存液：

细胞接收：

1：观察有无破损漏液情况 ，如有请拍照及时联系客服。

2 ：酒精消毒培养瓶表面后显微镜下观察细胞状态 ，观察拍照后不用打开培养瓶盖 ，放入培养箱静止

2- 3小时稳定细胞状态。

3 ：请按照细胞操作指南进行第一次传代冻存处理。

4 ：产品随货会附带细胞说明书、细胞培养操作指南、STR 鉴定、支原体检测报告。

5 ：若产品有异常或其他疑问 ，可随时联系客服

6.收到后，培养条件(完培配置)需跟保持一致，如有变动销售另行告知

仅限于科学研究 ，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

细胞复苏：

1) 准备工作：将培养液置 37℃水浴锅预热 30 分钟，随后将冻存的细胞从液氮中取出，转移

到-80℃冰箱，放置数分钟让残余液氮挥发；

2) 在超净台内用吸管吸取 6-7 mL 培养液至 15 mL 离心管中；

3) 将细胞从-80℃冰箱取出暂时放置于干冰里，复苏时稍稍甩动，去除残留的干冰和液氮，再迅速

用镊子夹住盖子放入 37℃水浴中快速晃动（注意：水不能没过盖子），使其在 1 分钟左右

融化；

4) 在超净台内，用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，稍稍晾干。用单道移液器将所有融化的细胞悬液

转至提前准备好的培养液中，盖上盖子，1100 rpm 室温离心 4 分钟收集细胞；

5) 超净台内小心吸弃上清，用单道移液器吸取 1 mL 新鲜培养液重悬细胞至单细胞悬液，再转

移至装有 4 mL 培养液的 T25 cm2培养瓶 (或者 6cm 的皿) 中，写上细胞名称、复苏日期、

代次，放置 37℃、5% CO2 饱和湿度培养箱内培养。

注意：请勿直接复苏到 T75 cm2瓶或 10cm 的皿。

细胞传代：

1) 常规细胞长至 80%-90%汇合度即可传代。在超净台内把培养瓶里的培养液倒至废液缸，用 1×PBS（T25 cm2培养瓶添加约 2~3mL，T75 cm2培养瓶约 4~5 mL）洗涤细胞 1~2 次，以去除残余的培养液和血清（血清含有胰酶的抑制因子）；

2) 加入相应体积的胰酶溶液，具体参考附表 1，轻轻晃动瓶子并使胰酶浸过细胞，将培养瓶放入培养箱孵育 1~2 分钟（若细胞难以消化，可适当延长孵育时间），待在显微镜下观察到大部分细胞变圆不贴壁，轻轻晃动和敲击培养瓶两侧有大量细胞脱离时，立即终止消化；

3) 加入 2 倍胰酶体积的培养液终止消化，并轻吹打细胞数次，使所有细胞脱壁；（注意：吹散细胞时注意要轻柔，尽量不产生气泡或尽可能产生少量气泡。）；

4) 用 10 mL 移液管转移细胞悬液到一支 50 mL 离心管中，同一批次的细胞可以合并收集在一起，视情况用适量 PBS 将培养瓶里的残余细胞洗下来，一起加到 50mL 离心管中。盖上盖子，做好标记；

5) 1100 rpm 室温离心 4 分钟，离心后，打开盖子弃上清，加 2mL 培养基重悬细胞；

6) 细胞按照一定的接种比例传代，按照 1：3 进行传代，若细胞在两天内长满可增加传代比例，若细胞生长三四天还未长满，可适当缩小传代比例。

细胞冻存：

1) 按细胞传代的方法，在超净台内把培养瓶里的细胞进行消化至单细胞悬液，加入培养基终止反应。所有液体转移到一支 50 mL 离心管中。

2) 用移液管吹打混合均匀，取 20 μL 进行细胞计数；

3) 1100 rpm 室温离心 4 分钟，离心后，打开盖子倒去上清，用 1~2 mL 4℃预冷的冻存液重悬细胞，随后加入冻存液调整至密度为 1x106-1x107个细胞/mL。

4) 将细胞悬液按 1 mL/管平均分装至冻存管中，旋紧盖子，冻存管应提前贴好细胞名称、细胞代次、数量、冻存日期；

5) 将冻存管放置于 4℃预冷的程序降温盒中，并在冻存结束的 15 分钟之内将程序降温盒放置超低温冰箱内；

6) ge夜后，将冻存细胞转移至液氮罐内保存。