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HUVSMC 细胞株复苏失败原因分析

发布时间:2017-03-23浏览:1139次

HUVSMC 细胞株复苏失败原因分析

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产品名称:HUVSMC 细胞

中文名称:人脐静脉平滑肌细胞

种属:人

来源:脐静脉平滑肌

培养条件:DMEM

生长状态:贴壁

HUVSMC 细胞株复苏失败原因分析

大规模培养技术应用简介

通过大规模体外培养技术培养哺乳类动物细胞是生产生物制品的有效方法。20世界60-70年代,就已创立了可用于大规模培养动物细胞的微载体培养系统和中空纤维细胞培养技术。近十数年来,由于人类对生长激素、干扰素、单克隆抗体、疫苗及白细胞介素等生物制品的需求猛增,以传统的生物化学技术从动物组织获取生物制品已远远不能满足这一需求。随着细胞培养的原理与方法日臻完善,动物细胞大规模培养技术趋于成熟。

所谓动物细胞大规模培养技术(large-scale culture technology)是指在人工条件下(设定ph、温度、溶氧等),在细胞生物反应器(bioreactor)中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。目前可大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、cho(中华仓鼠卵巢)细胞、BHK-21(仓鼠肾细胞)Vero细胞(非洲绿猴肾传代细胞,是贴壁依赖的成纤维细胞)等,并已成功生产了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。

在过去几十年来,该技术经有了很大发展,从使用转瓶(roller bottle) CellCube等贴壁细胞培养,发展为生物反应器(Bioreactor)进行大规模细胞培养。*代细胞培养技术核心问题是难以产业化或者说是规模化生产:一是在工艺生产时不能大规模制备产品;二是非批量生产容易导致产品质量的不均一性;三是难以对同批生产进行生产和质量控制。

随着生物技术的发展,迫切需要大规模的细胞培养,特别是培养表达特异性蛋白的哺乳动物细胞,以便获得大量有用的细胞表达产物。采用玻璃瓶静置或旋转瓶的培养方法,已不能满足所需细胞数量及其分泌产物。因而必须为工业化生产开创一种新的技术方法。自70年代以来,细胞培养用生物反应器有很大的发展,种类越来越多,规模越来越大,较常见的细胞培养生物反应器有空气提升反应器,中空纤维管反应器,无泡搅拌反应器及篮式生物反应器等。八十年代以来,人们逐渐开始以生物反应器培养代替鼠腹水的方法获得单克隆抗体。

动物细胞是一种无细胞壁的真核细胞,生长缓慢,对培养环境十分敏感。采用传统的生物化工技术进行动物细胞大量培养,除了要满足培养过程必需的营养要求外,有必要建立合理的控制模型,进行pH和溶氧(DO)的*控制。细胞生物反应器可通过微机有序地定量地控制加入动物细胞培养罐内的空气、氧气、氮气和二氧化碳四种气体的流量,使其保持*的比例来控制细胞培养液中的pH值和溶氧水平,使系统始终处于*状态,以满足动物细胞的生长对pH值和溶解氧的需要。如为提高或达到一定的溶氧水平可改变通入培养罐内气体中氧气和氮气的比例来实现控制DO值的目的。采用二氧化碳/碳酸氢钠(CO2/NaHCO3)缓冲液系统来控制培养液的pH值是一种较好的方法。

HUVSMC 细胞株复苏失败原因分析

Farage      人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞              弥漫大B淋巴瘤;淋巴结转移;女性         1640         悬浮

OCI-LY3    人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞              弥漫大B淋巴瘤;男性         1640         悬浮

3D4/21      猪肺泡巨噬细胞          肺泡巨噬细胞;SV40转化;Landrace          DMEM     贴壁

HEEpiC     人食管上皮细胞          食管;上皮细胞     1640         贴壁

CP70         人卵巢癌细胞              卵巢癌;女性         1640         贴壁

KYSE450   人食管癌细胞              食管鳞癌;男性     EMEM      贴壁

BNL1MEA.7R.1        小鼠肝上皮细胞     小鼠         肝;上皮细胞         1640         贴壁

HCC-78    人肺腺癌细胞             肺腺癌;男性         EMEM      贴壁

SHEE         永生化食管上皮细胞          食管;上皮细胞     1640         贴壁

ECV304    人脐静脉内皮(膀胱癌)细胞          膀胱癌     1640         贴壁

HM  人小神经胶质细胞              小神经胶质细胞     DMEM     贴壁

CTV-1        人急性T淋巴细胞白血病细胞          急性T淋巴细胞白血病;男性     1640         悬浮

GDM-1     人急性粒细胞白血病细胞          急性粒细胞白血病;女性     IMDM      悬浮

DOhh2      人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞              人弥漫大B淋巴瘤;男性     1640         悬浮

HBE 人支气管上皮细胞              支气管;上皮细胞         DMEM     贴壁

LADMAC  小鼠骨髓淋巴细胞              骨髓淋巴细胞;C3H      DMEM     悬浮

EOC20      小鼠小胶质细胞     小鼠         小胶质细胞; C3H/HeJ         DMEM     贴壁

A2058       人黑色素瘤细胞          黑色素瘤;淋巴结转移;男性     DMEM     贴壁

BMSCs     小鼠骨髓间充质干细胞         小鼠         骨髓间充质干细胞         DMDM     贴壁

HuCCT1   人肝内胆管癌细胞              肝内胆管癌;男性         DMEM     贴壁

huh28       人胆管癌细胞              肝内胆管癌     1640         贴壁

TE354T     人皮肤基底细胞癌细胞             皮肤基底细胞癌;女性         DMEM     贴壁

NCI-H820          人乳头状肺腺癌细胞          乳头状肺腺癌;淋巴结转移;男性     1640         贴壁

CAOV-3    人卵巢腺癌细胞          卵巢癌;女性         DMEM     贴壁

HSMC       人骨骼肌细胞              骨骼肌     DMEM     贴壁

VSMC       大鼠胸主动脉平滑肌细胞     大鼠         胸主动脉平滑肌     DMEM     贴壁

SNU398    人肝癌细胞          肝癌;男性     DMEM     贴壁+悬浮

CCC-HHM-2     人胚心肌组织来源细胞              心肌         DMEM     贴壁

HCFB        人心肌成纤维细胞              心肌;成纤维细胞         DMEM     贴壁

CCC-HEH-2       人胚心肌组织来源细胞              心肌         DMEM     贴壁

MT2 T淋巴细胞白血病细胞          T淋巴细胞白血病 1640         悬浮

HMSC       人骨髓间充质干细胞          骨髓间充质干细胞         McCoys    贴壁

HL-1 小鼠心房肌细胞     小鼠         心肌;SV40转化    DMEM     贴壁

TU212      人喉癌细胞          头颈鳞癌         1640         贴壁

SNU-C1    人结肠癌细胞              结肠癌;男性         1640         贴壁

HSF  人皮肤成纤维细胞              皮肤;成纤维细胞         DMEM     贴壁

M-20         人胚胎皮肤细胞          黑色素瘤         DMEM     贴壁

HNEpC     人鼻粘膜上皮细胞              鼻粘膜;上皮细胞         1640         贴壁

HFTF         人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞             胚胎;眼;成纤维细胞         DMEM     贴壁

MSC 猪骨髓间质干细胞              骨髓间质干细胞     1640         贴壁

SJSA-1       人骨肉瘤细胞              骨肉瘤;男性         DMEM     贴壁

MC38       小鼠结肠癌细胞     小鼠         结肠癌;雌性;C57BL/6        1640         贴壁

MeT-    人膜膜间皮细胞          膜膜间皮细胞;SV40转化;男性        DMEM     贴壁

Mousepodocyte       小鼠肾足细胞         小鼠         肾;足细胞     DMEM     贴壁

Ratpodocyte    大鼠肾足细胞         大鼠         肾;足细胞     DMEM     贴壁

         兔软骨细胞          软骨         DMEM     贴壁

HCM         人心肌细胞       心肌         DMEM     贴壁

SU-DHL-6 人弥漫大B淋巴瘤细胞              弥漫大B淋巴瘤;腹腔转移;男性     1640         悬浮

RC-K8       人弥漫大B淋巴瘤细胞              弥漫大B淋巴瘤;腹腔转移;男性     1640         悬浮

NCI-H929          人骨髓瘤细胞              骨髓瘤;女性         IMDM      悬浮

RT-112      人膀胱癌细胞              膀胱癌;女性         1640         贴壁

HCCLM3  人高转移肝癌细胞              肝癌;男性     DMEM     贴壁

SACC-83   涎腺腺样囊性癌细胞          涎腺腺样囊性癌     1640         贴壁

SACC-LM 涎腺腺样囊性癌细胞          涎腺腺样囊性癌     1640         贴壁

Malme-3M       人恶性黑色素瘤细胞          黑色素瘤;肺转移;男性     DMEM     贴壁

HCV-29     人膀胱上皮细胞          膀胱癌;男性         1640         贴壁

McA-RH7777   大鼠肝癌细胞         大鼠         肝癌;雌性;Buffalo     DMEM     贴壁

HOPC        人少突胶质前体细胞          少突胶质前体细胞         1640         贴壁

SNU-5       人胃癌细胞          胃癌;女性     1640         悬浮

MiaPaCa-2       人胰腺癌细胞              胰腺导管癌;男性         1640         贴壁

BIU-87      人膀胱癌细胞              膀胱癌;男性         1640         贴壁

KM12        人结肠癌细胞              结肠癌     IMDM      贴壁

NP69         人鼻咽上皮细胞          鼻咽;上皮细胞;SV40转化        1640         贴壁

NCI-H295R       人肾上腺皮质腺癌细胞              肾上腺皮质癌;女性     DMEM     贴壁

Karpas-422       人类B细胞非霍奇金淋巴瘤细胞              弥漫大B淋巴瘤;女性         1640         悬浮

HMVEC    人肺微血管内皮细胞          肺;微血管;内皮细胞         DMEM     贴壁

HPASMC  人肺动脉平滑肌细胞          肺动脉平滑肌细胞         DMEM     贴壁

HK-2          人肾小管上皮细胞              肾小管;上皮细胞;HPV16转化;男性     DMEM/F12      贴壁

ECA109    人食管癌细胞              食管鳞癌;女性     1640         贴壁

NHDF        正常人皮肤成纤维细胞              皮肤;成纤维细胞         DMEM     贴壁

LX-2  人肝星形细胞              肝;星形细胞;男性     1640         贴壁

MM.1S     人多发性骨髓瘤细胞          骨髓瘤;女性         IMDM      悬浮

KYSE270   人食管鳞癌细胞          食管鳞癌;男性     1640         贴壁

TE-10        人食管癌细胞              食管鳞癌;男性     DMEM     贴壁

Nb2  大鼠淋巴瘤细胞     大鼠         恶性淋巴瘤;雄性;Nb         1640         悬浮

C3H/10T1/2       小鼠间充质干细胞         小鼠         间充质干细胞;自发永生;C3H DMDM     贴壁

MSCs        小鼠脐带间充质干细胞         小鼠         脐带;间充质干细胞     DMDM     贴壁

HSC  人雪旺细胞          雪旺细胞         DMEM     贴壁

HFLS          人滑膜成纤维细胞              滑膜;成纤维细胞         DMEM     贴壁

S180          小鼠肉瘤瘤株         小鼠         小鼠肉瘤         1640         悬浮现在,由于动物细胞培养技术在规模和可靠性方面都不断发展,且从中得到的蛋白质也被证明是安全有效的,因此人们对动物细胞培养的态度已经发生了改变。许多人用和兽用的重要蛋白质药物和疫苗,尤其是那些相对较大、较复杂或糖基化(glycosylated)的蛋白质来说,动物细胞培养是的生产方式。60年代初,英国AVRI研究所在贴壁细胞系BHK21中将口蹄疫病毒培养成功后,从zui初的200ml800ml玻璃容器开始,很快就放大到30L100L不锈钢罐的培养规模。使用的是基于Eagle's配方的培养基,补充5%成年牛血清和蛋白胨。1967年以后,Wellcome(现为Cooper动物保健)集团分布于欧洲、非洲和南美洲8个国家的生产厂商,应用此项技术工业规模化生产口蹄疫疫苗和兽用狂犬疫苗,已掌握了5000L的细胞罐大规模培养技术。

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