U251细胞株复苏失败原因分析

U251细胞株复苏失败原因分析

产品名称：U251细胞

中文名称：人胶质瘤细胞

种属：人

来源：星形胶质细胞瘤；男性

培养条件：DMEM

生长状态：贴壁

2017年新学期，迎着朝阳，放飞梦想，久别重逢，相聚一堂，百尺竿头，更进一步，学无止境，自立自强，为国争光，慧颖细胞库为答谢各位莘莘学子的厚爱，在新学期开学之际，将慧颖细胞库1223株细胞特惠出售，更多活动详情，请致电市场部！

U251细胞株复苏失败原因分析

有的客户在COS-1细胞复苏传代后发现贴壁细胞状态不好，形态不佳，透光度亦不好，如果老师认为复苏过程没问题，那就核实下是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。

有的老师认为首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。

1、确认下冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，但我们因为这个问题就两种肺癌细胞和一种肝癌细胞专门做过试验，这个是绝大部分人细胞复不活的一个原因。太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。

2、老师的冻存液好不好，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。

3、老师的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过7%，大于5%，太多也不好。

4、老师在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。

5、老师的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。

6、如果老师的细胞污染，你是否能很快看到。从这个角度讲建议去除离心这步。

7、老师的细胞在冻存前是否过密。

还有，我们是不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。我们的细胞房不换拖鞋，非常脏，别人的细胞都污染，很多细胞都污染到绝种，但我们的只污染一次（两年内只有两瓶），那次是因为当初有某高校组织学生参观我们细胞库给动过了，我们每次细胞摆放顺序都是记住的。如果老师老怀疑孵箱污染，我们会认为老师的复苏培养细胞经验还需要进一步熟练和积累经验。

每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜。

U251细胞株复苏失败原因分析

293AD   人胚肾细胞  人  胚肾；5型腺病毒转化；女性   DMEM    贴壁   

T241    小鼠纤维肉瘤细胞    小鼠    纤维肉瘤    DMEM    贴壁   

RGM1    大鼠正常胃黏膜上皮细胞  大鼠    胃黏膜；上皮细胞；自发永生；Wistar  1640    贴壁   

BT  新生牛鼻甲细胞  牛  鼻甲；自发永生；Holstein    EMEM    贴壁   

USMC    大鼠血管平滑肌细胞  大鼠    血管平滑肌  DMEM    贴壁   

SBC-5   人小细胞肺癌细胞    人  小细胞肺癌；胸腔积液转移；男性  1640    贴壁   

D407    人视网膜色素上皮细胞    人  视网膜；色素上皮细胞；自发永生；男性    DMEM    贴壁   

ETCC-007    人乳腺导管癌细胞    人  浸润性导管癌；女性  DMEM    贴壁   

HLF-a  人肺鳞癌细胞    人  肺鳞癌；女性    1640    贴壁   

LK2 人肺鳞癌细胞    人  肺鳞癌；男性    1640    贴壁   

ESC 人表皮干细胞    人  表皮干细胞  DMEM    贴壁   

MASMC   小鼠气道平滑肌细胞  小鼠    气道平滑肌  DMEM    贴壁   

M109    小鼠肺癌细胞    小鼠    肺癌    DMEM    贴壁   

SK-GT-2 人胃癌细胞  人  胃底癌；男性    1640    贴壁   

MOLM-14 人急性髓系白血病细胞    人  急性髓系白血病；男性    IMDM    悬浮   

Kelly   人神经母细胞瘤细胞  人  神经母细胞瘤；女性  DMEM    贴壁   

NCI-H441    人肺腺癌细胞    人  乳头状肺腺癌；男性  1640    贴壁   

COLO-16 人皮肤鳞癌细胞  人  皮肤鳞癌；女性  DMEM    贴壁   

HEL299  人红白细胞白血病细胞    人  红白细胞白血病  1640    悬浮   

SK-UT-1 人子宫平滑肌瘤细胞  人  子宫平滑肌瘤；女性  EMEM    贴壁   

NB1-RGB 人皮肤成纤维细胞    人  皮肤；成纤维细胞；男性  DMEM    贴壁   

S91 小鼠黑色素瘤细胞    小鼠    黑色素瘤；雄性；DBA 1640    贴壁       

NCI-H2170   人肺鳞癌细胞    人  肺鳞癌；男性    1640    贴壁       

RPMI2650    人鼻腔上皮细胞  人  头颈鳞癌；胸腔积液转移；男性    DMEM    贴壁       

NCI-H2073   人非小细胞肺癌细胞  人  肺腺癌；男性    1640    贴壁       

HSC-5   人皮肤鳞癌细胞  人  皮肤鳞癌；男性  DMEM    贴壁       

KYSE520 人食管鳞癌细胞  人  食管鳞癌；女性  DMEM    贴壁       

OCM-1   人眼脉络膜黑色素瘤细胞  人  葡萄膜黑色素瘤；女性    DMEM    贴壁       

VE  人血管内皮细胞  人  血管；内皮细胞  DMEM    贴壁       

NT2/D1  人畸胎瘤细胞    人  畸胎瘤；肺转移；男性    DMEM    贴壁       

YTMLC-90    人肺鳞癌细胞    人  肺鳞癌；男性    1640    贴壁       

8305C   人甲状腺癌细胞  人  甲状腺癌；女性  DMEM    贴壁       

L132    人胚胎肺上皮细胞    人  胚肺；女性  DMEM    贴壁       

3T3-F442A   小鼠脂肪前体细胞    小鼠    脂肪前体细胞；雄性；Swiss albino    DMEM    贴壁       

SHI-1   人单核细胞白血病细胞    人  急性单核细胞白血病；男性    1640    悬浮       

HLE 人肝癌细胞  人  肝癌；男性  1640    贴壁       

OS-732  人骨肉瘤细胞    人  骨肉瘤  McCOY's   贴壁       

NCI-H526    人小细胞肺癌细胞    人  小细胞肺癌；骨髓转移；男性  1640    贴壁   

ReNcell CX  人神经干细胞    人  神经干细胞  DMEM    贴壁   

IHH-4   人甲状腺癌细胞  人  甲状腺乳头状癌；男性    DMEM    贴壁   

VK2/E6E7    人阴道上皮细胞  人  阴道；上皮细胞；HPV16转化；女性 DMEM    贴壁   

N1E-115 小鼠神经母细胞瘤细胞    小鼠    神经母细胞瘤；雄性；A/J EMEM    贴壁   

HMEL    永生上皮细胞    人  上皮细胞；永生化    1640    贴壁   

LN229   人胶质母细胞瘤细胞  人  胶质母细胞瘤；女性  DMEM    贴壁   

PANC05.04   人胰腺癌细胞    人  胰腺管癌；女性  DMEM    贴壁   

HRVEC   人视网膜微血管内皮细胞  人  视网膜微血管；内皮细胞  DMEM    贴壁   

rUCMSCs 大鼠脐带间充质干细胞    大鼠    脐带；间充质干细胞  DMEM    贴壁   

rRTEC   大鼠肾小管上皮细胞  大鼠    肾小管；上皮细胞    DMEM    贴壁   

HCC1569 人乳腺癌细胞    人  乳腺管癌；女性  DMEM    贴壁   

Mel-RM  人黑色素瘤细胞  人  黑色素瘤；神经节转移；男性  DMEM    贴壁   

WM-266-4    人黑色素瘤细胞  人  黑色素瘤；皮肤转移；女性    DMEM    贴壁   

UT-7    人急性成巨核细胞白血病细胞  人  急性成巨核细胞白血病；男性  1640    悬浮   

KPL1    人乳腺癌细胞    人  浸润性导管癌；女性  EMEM    贴壁   

PLA-802 人恶性横纹肌肉瘤细胞    人  肺泡横纹肌肉瘤；男性    DMEM    贴壁   

CEF 鸡胚成纤维细胞  鸡  胚胎；成纤维细胞    DMEM/F12    贴壁   

143B    人骨肉瘤细胞    人  骨肉瘤；男性    McCoy’s 贴壁   

CT26.CL25   小鼠结肠癌细胞  小鼠    结肠癌； BALB/c 1640    贴壁   

C166    小鼠血管内皮细胞    小鼠    血管内皮    DMEM    贴壁   

A375SM  人恶性黑色素瘤细胞  人  黑色素瘤；女性  DMEM    贴壁   

HKBML   人原发中枢淋巴瘤细胞    人  脑；淋巴瘤；男性    1640    悬浮   

为了应付季节变化CV-1细胞运输、培养带来的真菌等污染问题，公司特做以下建议：

1）细胞的运输、转移过程中，请勿打开自封袋；拿放细胞时请持瓶体，切勿在非无菌环球中碰触、拧动瓶口封口膜位置

2）进入生物安全柜前，打开自封袋拿出培养瓶，喷上酒精放进操作台（不建议使用酒精棉球擦拭），撕开封口膜后，用酒精灯外焰对瓶口烧灼一圈（3秒左右）

3）竖立培养瓶，拧开瓶盖（如是贴壁细胞，请用真空泵或吸管移除原配培养基，切勿让瓶口处的液体回流进瓶内）

4）更换为含10%-20%血清的*培养基，严格按照无菌操作要求继续培养

U251细胞株复苏失败原因分析