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U-118 MG细胞株复苏失败原因分析

发布时间:2017-02-24浏览:1167次

U-118 MG细胞株复苏失败原因分析

产品名称:U-118 MG细胞

中文名称:人脑星形胶质母细胞瘤

种属:人

来源:星形胶质母细胞瘤;男性

培养条件:DMEM

生长状态:贴壁

2017年新学期,迎着朝阳,放飞梦想,久别重逢,相聚一堂,百尺竿头,更进一步,学无止境,自立自强,为国争光,慧颖细胞库为答谢各位莘莘学子的厚爱,在新学期开学之际,将慧颖细胞库1223株细胞特惠出售,更多活动详情,请致电市场部!

 

U-118 MG细胞株复苏失败原因分析

有的客户在COS-1细胞复苏传代后发现贴壁细胞状态不好,形态不佳,透光度亦不好,如果老师认为复苏过程没问题,那就核实下是否是从液氮拿出直接放入温水,还有培养箱,二氧化碳浓度,培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%,看看能否帮助贴壁,当然也需要考虑血清问题,还有确信拿来的细胞没问题。

有的老师认为首先应该怀疑冻存,实际上复苏出问题的可能非常小,因为操作简单,而且死板。

1、确认下冻存的时候是不是消化的时间过长,这是一般人所注意不到的,即使书上也不讲这个问题,但我们因为这个问题就两种肺癌细胞和一种肝癌细胞专门做过试验,这个是绝大部分人细胞复不活的一个原因。太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力,表现为先贴后死,原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序,不可逆转的死亡。

 

2、老师的冻存液好不好,是什么,甘油还是DMSO,质量非常重要,否则也会死亡。

 

3、老师的冻存液的量加的是不是太多,ATCC推荐是不超过7%,大于5%,太多也不好。

 

4、老师在冻存的时候是不是把DMSO混均匀,这个有一些影响,但不算太大。

 

5、老师的冻存是否按部就班,就是所温度梯度是不是把握严格,很多人容易忘却这个事情,因为这个东西流程长。

 

6、如果老师的细胞污染,你是否能很快看到。从这个角度讲建议去除离心这步。

 

7、老师的细胞在冻存前是否过密。

 

还有,我们是不赞成孵箱污染这个概念的,所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话,这个细菌是源于孵箱的,但这不代表孵箱污染,因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌,问题在操作。我们的细胞房不换拖鞋,非常脏,别人的细胞都污染,很多细胞都污染到绝种,但我们的只污染一次(两年内只有两瓶),那次是因为当初有某高校组织学生参观我们细胞库给动过了,我们每次细胞摆放顺序都是记住的。如果老师老怀疑孵箱污染,我们会认为老师的复苏培养细胞经验还需要进一步熟练和积累经验。

每次污染的原因都要尽可能的找,以后就不犯同样的问题,这个很重要,不能靠猜。

U-118 MG细胞株复苏失败原因分析

293AD   人胚肾细胞  人  胚肾;5型腺病毒转化;女性   DMEM    贴壁   

T241    小鼠纤维肉瘤细胞    小鼠    纤维肉瘤    DMEM    贴壁   

RGM1    大鼠正常胃黏膜上皮细胞  大鼠    胃黏膜;上皮细胞;自发永生;Wistar  1640    贴壁   

BT  新生牛鼻甲细胞  牛  鼻甲;自发永生;Holstein    EMEM    贴壁   

USMC    大鼠血管平滑肌细胞  大鼠    血管平滑肌  DMEM    贴壁   

SBC-5   人小细胞肺癌细胞    人  小细胞肺癌;胸腔积液转移;男性  1640    贴壁   

D407    人视网膜色素上皮细胞    人  视网膜;色素上皮细胞;自发永生;男性    DMEM    贴壁   

ETCC-007    人乳腺导管癌细胞    人  浸润性导管癌;女性  DMEM    贴壁   

HLF-a  人肺鳞癌细胞    人  肺鳞癌;女性    1640    贴壁   

LK2 人肺鳞癌细胞    人  肺鳞癌;男性    1640    贴壁   

ESC 人表皮干细胞    人  表皮干细胞  DMEM    贴壁   

MASMC   小鼠气道平滑肌细胞  小鼠    气道平滑肌  DMEM    贴壁   

M109    小鼠肺癌细胞    小鼠    肺癌    DMEM    贴壁   

SK-GT-2 人胃癌细胞  人  胃底癌;男性    1640    贴壁   

MOLM-14 人急性髓系白血病细胞    人  急性髓系白血病;男性    IMDM    悬浮   

Kelly   人神经母细胞瘤细胞  人  神经母细胞瘤;女性  DMEM    贴壁   

NCI-H441    人肺腺癌细胞    人  乳头状肺腺癌;男性  1640    贴壁   

COLO-16 人皮肤鳞癌细胞  人  皮肤鳞癌;女性  DMEM    贴壁   

HEL299  人红白细胞白血病细胞    人  红白细胞白血病  1640    悬浮   

SK-UT-1 人子宫平滑肌瘤细胞  人  子宫平滑肌瘤;女性  EMEM    贴壁   

NB1-RGB 人皮肤成纤维细胞    人  皮肤;成纤维细胞;男性  DMEM    贴壁   

S91 小鼠黑色素瘤细胞    小鼠    黑色素瘤;雄性;DBA 1640    贴壁       

NCI-H2170   人肺鳞癌细胞    人  肺鳞癌;男性    1640    贴壁       

RPMI2650    人鼻腔上皮细胞  人  头颈鳞癌;胸腔积液转移;男性    DMEM    贴壁       

NCI-H2073   人非小细胞肺癌细胞  人  肺腺癌;男性    1640    贴壁       

HSC-5   人皮肤鳞癌细胞  人  皮肤鳞癌;男性  DMEM    贴壁       

KYSE520 人食管鳞癌细胞  人  食管鳞癌;女性  DMEM    贴壁       

OCM-1   人眼脉络膜黑色素瘤细胞  人  葡萄膜黑色素瘤;女性    DMEM    贴壁       

VE  人血管内皮细胞  人  血管;内皮细胞  DMEM    贴壁       

NT2/D1  人畸胎瘤细胞    人  畸胎瘤;肺转移;男性    DMEM    贴壁       

YTMLC-90    人肺鳞癌细胞    人  肺鳞癌;男性    1640    贴壁       

8305C   人甲状腺癌细胞  人  甲状腺癌;女性  DMEM    贴壁       

L132    人胚胎肺上皮细胞    人  胚肺;女性  DMEM    贴壁       

3T3-F442A   小鼠脂肪前体细胞    小鼠    脂肪前体细胞;雄性;Swiss albino    DMEM    贴壁       

SHI-1   人单核细胞白血病细胞    人  急性单核细胞白血病;男性    1640    悬浮       

HLE 人肝癌细胞  人  肝癌;男性  1640    贴壁       

OS-732  人骨肉瘤细胞    人  骨肉瘤  McCOY's   贴壁       

NCI-H526    人小细胞肺癌细胞    人  小细胞肺癌;骨髓转移;男性  1640    贴壁   

ReNcell CX  人神经干细胞    人  神经干细胞  DMEM    贴壁   

IHH-4   人甲状腺癌细胞  人  甲状腺乳头状癌;男性    DMEM    贴壁   

VK2/E6E7    人阴道上皮细胞  人  阴道;上皮细胞;HPV16转化;女性 DMEM    贴壁   

N1E-115 小鼠神经母细胞瘤细胞    小鼠    神经母细胞瘤;雄性;A/J EMEM    贴壁   

HMEL    永生上皮细胞    人  上皮细胞;永生化    1640    贴壁   

LN229   人胶质母细胞瘤细胞  人  胶质母细胞瘤;女性  DMEM    贴壁   

PANC05.04   人胰腺癌细胞    人  胰腺管癌;女性  DMEM    贴壁   

HRVEC   人视网膜微血管内皮细胞  人  视网膜微血管;内皮细胞  DMEM    贴壁   

rUCMSCs 大鼠脐带间充质干细胞    大鼠    脐带;间充质干细胞  DMEM    贴壁   

rRTEC   大鼠肾小管上皮细胞  大鼠    肾小管;上皮细胞    DMEM    贴壁   

HCC1569 人乳腺癌细胞    人  乳腺管癌;女性  DMEM    贴壁   

Mel-RM  人黑色素瘤细胞  人  黑色素瘤;神经节转移;男性  DMEM    贴壁   

WM-266-4    人黑色素瘤细胞  人  黑色素瘤;皮肤转移;女性    DMEM    贴壁   

UT-7    人急性成巨核细胞白血病细胞  人  急性成巨核细胞白血病;男性  1640    悬浮   

KPL1    人乳腺癌细胞    人  浸润性导管癌;女性  EMEM    贴壁   

PLA-802 人恶性横纹肌肉瘤细胞    人  肺泡横纹肌肉瘤;男性    DMEM    贴壁   

CEF 鸡胚成纤维细胞  鸡  胚胎;成纤维细胞    DMEM/F12    贴壁   

143B    人骨肉瘤细胞    人  骨肉瘤;男性    McCoy’s 贴壁   

CT26.CL25   小鼠结肠癌细胞  小鼠    结肠癌; BALB/c 1640    贴壁   

C166    小鼠血管内皮细胞    小鼠    血管内皮    DMEM    贴壁   

A375SM  人恶性黑色素瘤细胞  人  黑色素瘤;女性  DMEM    贴壁   

HKBML   人原发中枢淋巴瘤细胞    人  脑;淋巴瘤;男性    1640    悬浮   

为了应付季节变化CV-1细胞运输、培养带来的真菌等污染问题,公司特做以下建议:

1)细胞的运输、转移过程中,请勿打开自封袋;拿放细胞时请持瓶体,切勿在非无菌环球中碰触、拧动瓶口封口膜位置

2)进入生物安全柜前,打开自封袋拿出培养瓶,喷上酒精放进操作台(不建议使用酒精棉球擦拭),撕开封口膜后,用酒精灯外焰对瓶口烧灼一圈(3秒左右)

3)竖立培养瓶,拧开瓶盖(如是贴壁细胞,请用真空泵或吸管移除原配培养基,切勿让瓶口处的液体回流进瓶内)

4)更换为含10%-20%血清的*培养基,严格按照无菌操作要求继续培养

U-118 MG细胞株复苏失败原因分析

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