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CaOV3细胞培养
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初代培养
原理
将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。
仪器、材料及试剂
仪器:培养箱(调整至37℃),培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃)
材料:动物组织块
试剂:1640培养基(含20%小牛血清),0.25%胰酶,Hank′s液,碘酒
初代消化培养法
1.准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。
3.处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4.剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。
5.消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6.分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。
7.计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。
8.培养:置于36.5℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。
这一方法较简单,不需要离心,而且消化后细胞很少聚集成团,具体步骤如下:
1、吸尽待传代细胞瓶内的培养液,按1:1 的比例加入适量0.25%胰酶和0.0 2%EDTA(一般100ml培养瓶各加2滴管消化(消化时不要晃动培养瓶,以免消化不*而导致细胞成片脱落,从而导致细胞成团,无法吹散)。
2、消化致细胞变圆,细胞相互脱离接触但还未从瓶壁脱落时,吸尽胰酶和EDTA。
3、利用残留的胰酶和EDTA继续消化数分钟。
4、加入适量培养液,反复吹打,然后分别接种致新的培养瓶。
注:消化的时间需根据不同细胞摸索确定。
ACC-2人涎腺腺样囊性癌细胞
ACC-3人腺样囊性癌
ACHN人肾透明细胞癌细胞
AE-1杂交瘤细胞抗AChE
AE-2杂交瘤细胞抗AChE
AGS人胃腺癌细胞
AN3CA人子宫内膜腺癌细胞
ANA-1小鼠巨噬细胞
ARO甲状腺癌细胞(未分化)
AsPC-1人转移胰腺腺癌细胞
ATT-20小鼠垂体瘤
B16小鼠黑色素瘤细胞
B16-F10小鼠皮肤黑色素瘤细胞
B95-8绒猴EBV转化的白细胞
BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纤维细胞
Bcap-37人乳腺癌
BEL-7402人肝癌
BEL-7404人肝癌
BEL-7405人肝癌
Beta-TC-6小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞
BGC-823低分化胃腺癌
BHK-21 [C-13]仓鼠肾成纤维细胞
BIU-87人膀胱癌细胞
BMSC人骨髓间充质干细胞
BNL CL.2小鼠胚胎肝细胞
BRL大鼠肝细胞
BRL 3A大鼠肝细胞
BT-20人乳癌
BT-325人脑多形性胶质瘤细胞
BT474人乳腺导管癌细胞
BT-549人乳腺管癌细胞
BxPC-3人原位胰腺腺癌细胞
C127小鼠乳腺肿瘤细胞
C200人卵巢癌
C26小鼠结肠癌
C2C12小鼠成肌细胞
C-33 A人子宫颈癌
C3H小鼠胚胎成纤维细胞
C6大鼠脑胶质瘤细胞
Ca Ski人宫颈癌肠转移细胞
Caco-2人结直肠腺癌细胞
CaKi-1人肾透明细胞癌细胞
CaKi-2人肾透明细胞癌细胞
CAL-27人舌鳞癌细胞
Calu-1人肺癌细胞
Calu-3人肺腺癌 (胸水)
Calu-6人退行性癌细胞
CaOV3人卵巢癌细胞
Capan1人胰腺癌细胞
Capan2人胰腺癌细胞
CaSki人宫颈肠转移癌细胞
CBRH-7919大鼠肝癌细胞
CCD-1095Sk人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞
CCRF-CEM人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞
CEM/C1人急性淋巴细胞白血病细胞
CFPAC-1人胰腺癌细胞
Chang liver人张氏肝细胞
CHL仓鼠肺细胞
CHO中国仓鼠卵巢细胞
CHO/dhFr仓鼠卵巢细胞,二氢叶酸还原酶缺陷
CHO-K1仓鼠卵巢细胞亚株
CL1人前列腺癌
CCRF-CEM人鼻咽癌细胞
CNE-2人鼻咽癌细胞
COLO 205人结肠癌细胞
COLO 320DM人结直肠腺癌细胞
COLO-704人卵巢癌细胞
COLO720E人卵巢癌细胞
COS-1非洲绿猴SV40转化的肾细胞
COS-7非洲绿猴SV40转化的肾细胞
COV362人卵巢癌细胞
COV434人卵巢癌细胞
COV504人卵巢癌细胞
COV644人卵巢癌细胞
CRFK猫肾细胞
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细胞株、Hs578Bst细胞、ND7/23细胞、bel-7407细胞、EA.hy926细胞、A2780细胞、人肝癌细胞株、RAW264.7细胞、NB4细胞、Sp2/0细胞、KYSE30细胞