BT474细胞形态

原代细胞传代技术

一、贴壁细胞的消化法传代 
1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。
2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或与EDTA混合液）轻轻摇动培养瓶，使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时，弃去消化液，加入培养液终止消化。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中继续培养。第二天观察贴壁生长情况。

二、悬浮细胞的传代 
1、直接传代
① 让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3。
② 用吸管吹打形成细胞悬液后，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。
2、离心法传代
① 将细胞连同培养液一并转移到离心管内，离心800-1000rpm，5分钟。
② 去除上清，加新的培养液到离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液。
③ 将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。

牙髄细胞的传代

牙髄细胞中主要是成纤维细胞，贴壁生长。

传代方法：

弃培养液（尽量吸干）

加基础培养基配置的0.2%trypsin+0.02%EDTA

轻轻翻转培养瓶使消化液浸过有细胞的瓶壁

重复4～5次

迅速吸去消化液

镜下观察细胞变圆回缩（约1分钟）

加入*培养液（DMEM+10% FCS）终止反应

吹打后，1:2接种，继续培养。

大鼠系膜细胞传代

我用的是DMEM低糖培养液，每次传代前，将培养液，PBS，0.25％的胰酶（没加edta）,放37度烤箱预热（此做法是减少4度的凉液体对细胞的刺激，以防细胞死亡）。

每次换液时，一定要烧培养瓶口，做好无菌观念。

先抛弃旧液，用PBS先冲净残留的血清，再加PBS用滴管轻轻的吹打细胞，将死细胞吹打掉。

加胰酶时注意：若用加edta的，记住了，在镜下看到细胞在收缩时，赶快吸出胰酶，加血清中止消化。血清可抑制胰酶的活性，但对edta无效。前后大概不到10秒。若用没有加edta的，时间要适当延长，看到细胞变为有立体感时，加血清，轻轻拍打，细胞就会散开。若团块大，可用滴管吹打。

动作一点要快，不能让细胞离开培养箱时间太长。