服务热线:
产品目录/ PRODUCT MENU
技术支持

您现在的位置:首页  >  技术文章  >  JCA-1细胞 JCA-1细胞

JCA-1细胞 JCA-1细胞

发布时间:2016-06-02浏览:1124次

JCA-1细胞 JCA-1细胞 中文名称:人前列腺癌细胞。慧颖提供JCA-1细胞价格,支原体检测报告,形态,来源,STR鉴定,细胞特征特性,培养条件,操作注意事项,订购流程,复苏周期(货期),售后说明等。慧颖生物注重产品品质,提供zui的产品和售后,自公司成立以来,获得了同行业的*。六月,是繁忙的,六月是收获的季节,沉甸甸的麦穗,已经颗粒归仓。六月我们一起前行,成就人生,慧颖祝您万事如意,心想事成。

慧颖生物宗旨是:紧跟市场、更新快、产品全、质控严、有保障、送货快。慧颖细胞库热卖产品:9204细胞,MOLM14细胞,WB-F344细胞,U251细胞,TMNE细胞,THP-1细胞,SW620细胞,HL-60细胞,SP2/0细胞,SMMC-7721【SMMC7721】细胞,L-02细胞,SK-N-SH细胞,SGC7901/VCR细胞,SGC-7901细胞,RAW264.7细胞,Ramos细胞,QSG7701细胞,PC-12细胞,P3X.65Xg.653细胞,NIH3T3细胞,MG-63细胞,MDA-MB-231细胞,MDA-MB-453细胞,A549细胞,A549/DDP细胞,MC-3T3-E1【MC3T3-E1】细胞,JEG-3细胞,JB6-C30细胞,HUVEC-12细胞,HT-29细胞,CTLL-2细胞,HNE2细胞,HO-8910细胞,HME2细胞,HK-2细胞,HFF细胞,HepG2细胞,HCT-8/VCR细胞,HCT-116细胞,GH3细胞,Cos-7细胞,CHO细胞,CaSKi细胞,Caov-3细胞,BxPC-3细胞,BRL细胞,BEL7404细胞,B16细胞,A375细胞,A431细胞,5-8F细胞,BGC 823细胞,NCI-H446细胞,hBMECs细胞等相关ATCC细胞,Scincell细胞,癌细胞,细胞株细胞系、大鼠细胞株细胞系、小鼠细胞株细胞系、兔源细胞株细胞系、其他源细胞株细胞系、杂交瘤细胞库。

 

封闭

在转膜之后,也就是抗体孵育之前,需要对膜进行封闭。封闭是为了使抗体仅仅只能跟特异的蛋白质结合而不是和膜结合。常用的封闭液有BSA,脱脂奶粉,血清等,一般用的是脱脂奶粉。脱脂奶粉有些特殊情况是不适用的 ,脱脂奶粉不能与生物素化或伴刀豆蛋白标记的抗体一起使用;不能用于磷酸化抗体对蛋白磷酸化的检测;不能用于碱性磷酸酶(AP)显示方法。

抗体孵育——WB真正的难点:抗体的使用是一种艺术,一种抗体一个脾气。

对WB结果有决定性影响的因素是抗体的效价和如果正确使用手中的抗体。 无论你如何提高自己的转膜技术,和低效之间往往只有数倍的差异, 而抗体的效价可以差数千倍以上;同样,正确使用抗体可以保证抗体效价 不被过分的拮抗,谋求特异性和非特异性背景之间差异的zui大化。

一抗:*抗体能和非抗体性抗原特异性结合的蛋白,包括单克隆抗体和多克隆抗体;二抗:第二抗体能和一抗结合,即抗体的抗体,其主要作用是检测抗体的存在,放大一抗的信号。一般二抗都会偶联可以检测的标记(如荧光、放射性、化学发光或显色基团),用来检测一抗;如果一抗本身偶联有这些标记,则不需要二抗,就是所谓的直接WB。

那么如何正确的来选择二抗呢?*根据一抗的种属来源选择二抗;第二根据一抗的类型选择二抗,根据单体数量和重链分类,将抗体分为IgA,IgD,IgE,IgG,IgM五类。其中又可分为几个亚型:IgA1-2,IgG1a,2a,2b,3,IgM1-2。

显色

酶促反应可以搭配不同的底物从而实现不同的显色方法:化学发光Chemiluminescent 和底物显色Colormetirc/Chromogen,前者灵敏度很高——随着各大厂家努力开发研制灵敏度更高的发光底物,化学发光法的灵敏度已经达到pg别,甚至还有 Femto级别的,灵敏度超过了同位素;而后者由于直接显色而操作简便且成本低。zui为大家熟悉当数辣根过氧化物酶HRP(Horseradish Peroxidase,属于过氧化物酶POD类)和碱性磷酸酶AP(Alkaline Phosphatase),此外还有比较少见的葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase)、β半乳糖苷酶 β-Galactosidase 。

常见问题分析:

1.曝光后背景过高且不均匀

封闭不充分:延长封闭时间,更换合适的封闭剂;一抗浓度过高:增加一抗稀释倍数;抗体孵育温度过高:4℃孵育;二抗非特异性结合或与封闭剂交叉反应:设置二抗对照(不加一抗),降低二抗浓度。

洗膜不充分:增加洗膜次数

2.没有阳性条带或很弱

一抗、二抗不匹配:订购试剂时认真选取一抗与组织种属,一抗与二抗或底物与酶系统之间相匹配的抗体及底物,可通过设置内参验证二级系统的有效性; 更换更好的抗体;一抗,二抗浓度低:增加抗体浓度,延长孵育时间封闭剂与一抗有交叉反应:封闭时使用温和的去污剂,更换封闭剂样本中无靶蛋白或靶蛋白含量过少,设置阳性对照,如果阳性对照有结果,但标本没有则可能是标本中不含靶蛋白或是靶蛋白含量太低,后者可增加样本上样量;转膜不充分还洗膜过度:使用丽春红S检测转膜效果,PVDF膜需浸透,正确的转膜操作,勿过度洗膜;曝光时间过短:延长曝光时间,更换更灵敏的发光液

3.背景有白色/黑色斑

转膜时有气泡或抗体分布不均:尽量除去气泡,抗体孵育时保持摇动;封闭剂溶解不充分有颗粒状

JCA-1细胞 JCA-1细胞冻存:

1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清

2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)

3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.

放入-20度冰箱2-4个小时后.再放入-80度冰箱过ye,第二天放入液氮罐保存.

JCA-1细胞 JCA-1细胞常见的污染如下:

1、细菌:细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。

2、霉菌:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差,

用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。

3、支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢凋亡。

4、黑蛟虫:可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的。

5、真菌:一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。

6、原虫:培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,zui终形成恶性循环。

JCA-1细胞 JCA-1细胞运输:冻存的细胞干冰运输,复苏的细胞冰袋运输。冬季我们会选择全血清包被细胞株运输,运输途中细胞处于休眠状态,避免天气过冷导致的细胞死亡。

 

上海慧颖生物科技有限公司 版权所有    备案号:沪ICP备12016933号-2

技术支持:化工仪器网    管理登陆    网站地图

细胞株、Hs578Bst细胞、ND7/23细胞、bel-7407细胞、EA.hy926细胞、A2780细胞、人肝癌细胞株、RAW264.7细胞、NB4细胞、Sp2/0细胞、KYSE30细胞

联系电话:
15821734033

微信服务号