3T3-L1细胞 @慧颖细胞库 培养注意事项

              3T3-L1细胞 @慧颖细胞库 培养注意事项

有的老师在培养3T3-L1细胞中，发现都粘附着长在一起，平常状态下看起来也会像长满融合了一样。慧颖技术人员对此总结了下3T3-L1细胞传代步骤以及培养注意事项，仅供各位老师参考：

传代步骤：

以用10 cm细胞培养皿培养的3T3-L1细胞为例：

    1）待培养皿中的细胞生长至密度为95-100%时，弃细胞培养基，并加入5ml 1×PBS轻晃洗涤一次；

  2）弃1×PBS，加入1ml胰酶，摇匀使所有的细胞均被胰酶覆盖后37℃消化1~2min，显微镜下观察到细胞变圆并从平皿上脱落下来即为消化*；

  3）加入3ml新鲜的DMEM培养基（含10%FBS，1%双抗），终止胰酶消化，并将形成的细胞悬液吹打混匀；

  4）按实验需要取细胞悬液接种到新的10 cm细胞培养皿内，并用DMEM培养基补足体积至10ml，按十字形的方式摇匀后，置于CO2培养箱37℃条件下继续培养。

注意事项：

1）不要对细胞进行频繁的传代处理，传代时，细胞密度已生长至85%以上；

  2）3T3-L1贴壁不是十分牢，禁止培养过程中频繁地移动；

  3）消化时间不要超过两分钟，不要消化过头，消化过程中，可以在显微镜下观察，细胞变圆后，轻拍培养皿，如细胞可以呈流沙状流动，即可立即终止消化；

  4）终止消化后，细胞轻轻吹打10~20次即可，不要太用力吹打或者吹打太多次，尽量减少机械伤害。

5）传代时接种的细胞量不要太少，否则容易生长缓慢或者长不动，传代比例1:3~1:8。

6）如细胞状态还是比较差，可尝试在细胞培养基中加入适量的丙铜酸钠或谷氨酰胺（如1%）。

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