HL-7702【HL-7702】细胞培养常见问题

HL-7702【HL-7702】细胞常见问题 1：

液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？

答：要冷藏！！因为液体培养基冷冻后再化冻时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响,对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月~一年。

HL-7702【HL-7702】细胞常见问题 2：

培养液pH对细胞生长的影响有哪些？

答：由于大多数细胞适宜pH为7.2~7.4，偏离此范围对细胞将产生不良的影响。各种细胞对pH的要求也不*相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。

但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更利于细胞生长。因此，我们在配制培养用液时，可把液体的pH稍微调得偏酸一些。培养基在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的pH还会向上浮动0.2左右。

HL-7702【HL-7702】细胞常见问题3：

细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？

答：不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力zui强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。

培养细胞每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。

细胞中心通常使用的消化液浓度为：

（1）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；

（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。

（3）0.25% 胰蛋白酶

    溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。

多数细胞传代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ这种消化液。

HL-7702【HL-7702】细胞常见问题4：

培养细胞状态欠佳原因有哪些：

答：1、  培养基的新鲜程度：一般加入血清后的*培养基，2周内用完。否则血清有效成分失活，影响细胞培养。

         建议：*培养基一次不要配太多，200ml以下。或根据用量决定。

 2、  细胞外源微生物的污染：细胞不宜长期体外培养，因为外源微生物污染的几率大大提高。易发现和难发现的。影响细胞状态。

        建议：实验前冻存一批细胞，隔几个月重新复苏。即保证实验所用细胞代数一致，又将外源污染的后果降到zui低。

3、  排除其他原因：如更换培养条件（血清、培养基等）；使用器皿的洁净程度；

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