NCI-H446细胞说明书，人小细胞肺癌细胞

细胞系特征

细胞株名称：NCI-H446 人小细胞肺癌细胞

种属：人,男性

组织来源：肺癌；转移灶：肋膜渗出癌；小细胞肺癌

生长特性：贴壁生长

形态特征：上皮细胞

微生物及支原体检测：阴性

细胞背景：NCI-H446细胞株从一位小细胞肺癌患者的胸水中建立。 细胞的原始形态并不具有小细胞肺癌特征。 这个细胞株是小细胞肺癌的生化和形态学上的变种，表达神经元*的烯醇酶和脑部肌酸激酶同功酶。 左旋多巴脱羧酶、蚕素、抗利尿激素、催产素或胃泌激素释放肽未达到可检测水平。

安全性：所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。

培养条件：

*培养基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清

血清我们推荐用:

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培养条件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%

传代方法：

收到细胞后，在倒置镜下(是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量*培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加*培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的*次传代一般是一传二。

注：1、观察细胞在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

冻存方法：

冻存液：90%胎牛血清，10%DMSO

储存：液氮储存