小鼠I型胶原C端肽（CTX-I）Elisa试剂盒说明书

小鼠I型胶原C端肽(CTX-I)Elisa试剂盒说明书

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠CTX-I抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的CTX-I会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠CTX-I抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠CTX-I抗体与结合在包被抗体上的小鼠CTX-I结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，CTX-I浓度与OD₄₅₀值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中CTX-I的浓度。

标本收集:

1. 血清：全血标本于室温放置2小时或4℃置夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

5. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测

6. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融，1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。

8. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品zui高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验，以确定稀释倍数)。

小鼠I型胶原C端肽(CTX-I)Elisa试剂盒说明书

注意事项：

1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。

1. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
2. 加样：加样或加试剂时，*个孔与zui后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间控制在10分钟内。推荐设置复孔。
3. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。
4. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。
5. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。
6. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。
7. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
8. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，使用微量振荡器(使用zui低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。
9. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液标本时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。
10. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）
11. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！

小鼠I型胶原C端肽(CTX-I)Elisa试剂盒说明书

更多试剂盒请点击：http://www.chem17.com/st226901/list_673388.html