HIV-1 p24抗原 ELISA检测试剂盒说明书

HIV-1 p24抗原 ELISA检测试剂盒说明书

本试剂盒采用夹心法原理检测人血清/血浆、培养物上清中的HIV-1 p24抗原，预先采用p24单克隆抗体包被固相微孔板。若样本中含有HIV-1 p24抗原，则与包被板结合，再加入生物素（Biotin，Btn）标记p24多克隆抗体，反应后再加入辣根过氧化物酶标记的亲和素（SA-HRP），结合形成夹心复合物，洗涤除去未结合的酶标记物，加入HRP底物液，读数测量，根据临界值判断样本中是否含有HIV-1 p24抗原。

[试剂组分]

1. 包被板：包被有抗HIV -1 p24抗体的96孔酶标板， 2～8℃保存。
2. 阴性对照：1.0mL/瓶；含正常人血清，防腐剂和色素，2～8℃保存。
3. P24抗原阳性对照：1.0mL/瓶×1瓶；含基因工程P24抗原的人血清，防腐剂和色素，2～8℃保存。
4. 结合物1：含有生物素标记的P24多克隆抗体（Btn-P24抗体）
5. 结合物2：含有辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（SA-HRP）
6. 底物液A：
7. 底物液B：
8. 终止液：
9. 浓缩洗涤液：
10. 封板膜：
11. 说明书：1份。

[操作程序]

1. 实验设计：将包被板从密封袋中取出，根据所需数量在板架上放好微孔板条。设空白对照一孔，阴性对照两孔，P24抗原阳性对照2孔，HIV抗体阳性对照2孔。
2. 加结合物1：每孔加入结合物1  25μL。
3. 加样：依次加入样品、阴性对照、P24抗原阳性对照75μL。
4. 温育：用微量震荡器充分振荡混匀，用封板膜封盖反应板，37℃温育60分钟；

5． 洗板：撕去封板膜，吸干微孔板中所有液体，每孔加入稀释好的洗涤液400μL，浸泡至少30秒，吸干。如此洗板5次，zui后在干净的吸水纸上拍干。

1. 加酶：空白孔除外，每孔加入结合物2   100μL。
2. 温育：用新的封板膜封盖反应板，37℃温育30分钟。
3. 洗板：撕去封板膜，如上述洗板方法洗涤5次，zui后在干净的吸水纸上拍干。

9． 加底物液： 每孔加入底物液A 50μL，底物液B 50μL，用微量震荡器充分振荡混匀，37℃避光温育15分钟。

10． 加终止液：每孔加入终止液50μL。

1. 检测：双波长测量