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小鼠软骨糖蛋白39(HC gp-39)Elisa试剂盒说明书

发布时间:2014-06-17浏览:1321次

(本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!)

Chinese Name/ 中文名

小鼠软骨糖蛋白39(HC gp-39)Elisa试剂盒

English Name/ 英文名

Mouse Cartilage glycoprotein 39 (HC gp-39) ELISA Kit

Catalog Number/ 目录号

Hu848421HY

Organism/ 种属

Mouse 小鼠

Packing/ 规格

96T/Kit(8*12strips)/ 48T/Kit(8*6strips)

Detection Range/ 检测范围

5 ug/L -200 ug/L

Method/ 检测方法

Sandwich-ELISA/双抗体夹心ELISA

Sample Type/ 样品类型

Serum, Plasma, Other biological fluids/血清、血浆等其它生物样品

Other Names/ 其他名称

HC gp-39

Supplier Data Page/ 供应商资料

Product Description/中英文使用说明书

实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 小鼠软骨糖蛋白39(HC gp-39)水平。用纯化的小鼠软骨糖蛋白39(HC gp-39)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入软骨糖蛋白39(HC gp-39),再与HRP标记的软骨糖蛋白39(HC gp-39)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的软骨糖蛋白39(HC gp-39)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠软骨糖蛋白39(HC gp-39)的浓度。

试剂盒组成:

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

 

封板膜

2片(48)

2片(96)

 

密封袋

1

1

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品:270ug/L

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20ml×20倍)×1瓶

(20ml×30倍)×1瓶

2-8℃保存

注意事项:

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6. 底物请避光保存。

7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9. 本试剂不同批号组分不得混用。

操作步骤:

1.  标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ug/L,120 ug/L ,60 ug/L,30 ug/L, 15 ug/L)。

2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.  温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.  配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.  温育:操作同3。

8.  洗涤:操作同5。

9.  显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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