HEK-293-6e细胞培养

HEK-293-6e细胞培养

使用F17+L谷氨酰胺培养液，37℃ 下置于5％CO₂培养箱中。待细胞融合至80％，用0．25％胰酶消化传代后接种(细胞密度5 XlO⁴)于培养瓶或孔板，待细胞融合至约70％后用于实验。

细胞培养方法如下： 

1.贴壁细胞细胞换液：

1）吸光培养瓶中的培养液。

2）用1xD-hank`s洗一次。

3）加入适量的新鲜培养液，接种于新的培养瓶内，放入培养箱内培养。

2.悬浮细胞换液

1)吸光培养瓶中的培养液放入15ml离心管中离心1500rpm 5min。

2)细胞沉淀用1xD-hank`s洗一次。

3)加入适量的新鲜培养液，接种于新的培养瓶内，放入培养箱内培养。

3.细胞传代（贴壁细胞传代采用胰酶消化法，常用消化液为0.25%的胰蛋白液）

1）吸光培养瓶中的培养液。

2）用1xD-hank`s洗一次。

3）加入0.5ml-1ml 0.25%的胰蛋白酶液（以消化液能覆盖整个瓶底为准）。

4）静止2-10分钟（显微镜下动态监测）。

5）吸去胰蛋白酶液，加入培养基。

6）用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液。

7）吸取1/5-1/10细胞悬液接种于新的培养瓶内。

8）加入适量的新鲜培养液，接种于新的培养瓶内，放入培养箱内培养。

4.细胞的冻存：

1）预先配制冻存液：90%胎牛血清+10%DMSO

2）取对数期生长细胞经胰酶消化后加入培养液终止胰酶反应，离心（1500rpm 5min）去上清留沉淀加适量冻存液，用吸管吸打制成细胞悬液（1 XlO⁵-5X10⁶/ml)

3）加入1ml细胞悬液于冻存管中，密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。

5.细胞复苏：

1）从液氮中取出冻存管，迅速投入37度-38度水浴中

2）使其融化5min内用培养液稀释至原液体的10倍以上，低速离心1500rpm 5min

3）去上清，加入培养液，细胞转入培养器皿中进行培养

如果培养基还未到，我们建议离心，离心后分别收集细胞和培养基。取5ML培养基重悬细胞沉淀。接种于T25培养瓶中。