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人抗甲状腺过氧化物酶抗体ELISA试剂盒Kit|TPO-Ab说明书

发布时间:2013-07-02浏览:2067次

人抗甲状腺过氧化物酶抗体ELISA试剂盒Kit|TPO-Ab说明书

产品名称:人抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-AbELISA试剂盒

别名:人抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-AbELISA检测试剂盒;人抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-AbELISA酶免试剂盒;人抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-AbELISA Kit

英文名称:Human anti-Thyroid-Peroxidase antibody (TPO-Ab) ELISA Kit

规格:96T*1

检测范围:0.1 mIU/L -4 mIU/L 

试剂盒保存:4°C

有效期:一年

 

 

预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等其它相关液体中TPO-Ab含量。

 

实验原理:本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)水平。用纯化的人甲状腺过氧化物酶(TPO-Ab)抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被抗原的微孔中依次加入抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab),再与HRP标记的抗甲状腺过氧化物酶(TPO-Ab)抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)浓度。

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品:4.5 mIU/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

操作步骤:

1、标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为3mIU/L2 mIU/L 1 mIU/L0.5 mIU/L 0.25 mIU/L)。

2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3、  温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4、  配液:将3048T20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水3048T20倍)倍稀释后备用。

5、  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6、  加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7、  温育:操作同3

8、  洗涤:操作同5

9、  显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10、            终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11、            测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项:

1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4、请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6、底物请避光保存。

7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9、本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

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