Caco2结肠癌细胞系（株）传代基本技术

Caco2结肠癌细胞系（株）传代基本技术

1. 选用细胞生长状态好（80－90％），生长数量大于5×105 的细胞进行传代。

2. 吸除细胞培养液。用含双抗的1×PBS（pH7.4）清洗细胞培养瓶2 次。加入1ml 消化液至细胞培养瓶，轻轻摇动，使细胞消化液刚刚覆盖细胞表面。注：消化液配比为：0.25％胰蛋白酶＋0.02％EDTA。

4. 将细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37℃培养箱静置培养数分钟后，在显微镜下观察细胞的消化状态。

注意：若贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，即可用手指轻轻拍打细胞培养瓶侧部或底部使大部分贴壁细胞脱落，之后立即加入细胞终止液，终止细胞消化。每种细胞的消化时间有差异，消化时注意观察，不要消化太久。

5. 吹打培养瓶中悬浮细胞若干次，吸出细胞悬浮液，转入15ml 离心管中，

1000rpm 离心5 分钟。

6. 弃离心管中上清液，加入细胞培养液重悬细胞。细胞计数，确定细胞数量。

7. 细胞分瓶后，加入适量细胞培养液至细胞培养瓶中，置于5%CO2、95%空气、37℃ 培养箱静置培养24 小时。

来源：慧颖生物实验室

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