赛默飞lipornaimax说明书（货号：13778075， 13778150）

赛默飞lipornaimax说明书（货号：13778075， 13778150）

一、两款货号规格区分

1. 13778075

规格：0.75 mL

适用：常规小批量RNAi实验、实验室日常siRNA敲低，适合中小型细胞筛库

2. 13778150

规格：1.5 mL

适用：高通量筛选、多批次重复实验、长期稳定使用，用量更大

赛默飞lipornaimax说明书：

适用：siRNA、miRNA、Stealth RNAi双链；货号13778075（0.75mL）/13778150（1.5mL）

一、前置准备与关键注意事项

1. 储存：2–8℃冷藏，严禁冻存；使用前轻柔颠倒混匀，不可剧烈震荡

2. 稀释液：仅用无血清Opti-MEM I，不能加血清、双抗

3. 细胞培养基：转染全程培养基不加抗生素（抗生素会升高细胞毒性）

4. 孵育条件：复合物室温静置10–20min，不可超过30min，避免复合物失效

5. 无需换液：加完复合物直接放回培养箱，24–72h收样，中途不用换液

二、各孔板标准配比（推荐，终浓度10nM siRNA）

培养板 铺板培养基 siRNA用量 RNAiMAX用量 Opti-MEM总稀释体积 转染时汇合度

96孔板 100μL 1pmol 0.3μL 2×10μL 30%–50%

24孔板 500μL 6pmol 1μL 2×50μL 30%–50%

6孔板 2.5mL 30pmol 5μL 2×250μL 30%–50%

三、正向转染（常规方案，贴壁细胞）

步骤1：铺细胞（转染前1天）

1. 无抗生素培养基铺细胞，转染当天汇合度30%–50%

2. 6孔板：每孔铺1×10⁵个细胞，2.5mL无抗培养基

步骤2：配制siRNA稀释液（A液）

以6孔板单孔为例：

1. 取250μL Opti-MEM，加入30pmol siRNA，轻柔吹打混匀

步骤3：配制转染试剂稀释液（B液）

1. 另取250μL Opti-MEM，加入5μL RNAiMAX，轻柔混匀

步骤4：制备转染复合物

1. 将B液全部加入A液，轻轻颠倒混匀，室温静置10–20min

步骤5：加复合物转染

1. 把500μL混合复合物直接滴入6孔细胞中，轻轻晃板混匀

2. 37℃、5%CO₂培养箱静置培养

3. 24–48h可检测基因敲低；72h适合蛋白水平检测

四、反向转染（高通量筛库、难转染细胞如HepG2、MCF-7）

优势：当天铺细胞当天转染，节省操作时间

1. 孔内先加稀释好的siRNA+RNAiMAX复合物，室温静置15min

2. 细胞消化计数，细胞量为正向转染2.5倍，用无抗培养基重悬后直接加入含复合物的孔中

3. 正常孵育，无需换液

五、特殊细胞优化方案

1. 原代细胞/巨噬细胞（NR8383）

siRNA用量不变，RNAiMAX提升20%–30%，复合物孵育20min；降低细胞铺板密度，减少毒性

2. 悬浮细胞

采用反向转染，转染后24h半量换液，降低脂质体毒性

3. 共转染siRNA+少量质粒DNA

先单独配siRNA复合物、质粒+Lip3000复合物，分别孵育后混合再加入细胞，不建议单用RNAiMAX转质粒

六、常见问题与操作禁忌

1. 敲低效率低

• 复合物静置超时、培养基加了双抗、细胞密度过高/过低

• 优化：siRNA终浓度上调至20–30nM，试剂用量增加20%

2. 细胞大量死亡

• RNAiMAX过量、siRNA浓度过高、使用含抗生素培养基

• 优化：降低试剂用量，转染24h后更换新鲜培养基

3. 禁止操作

• 用PBS、普通培养基稀释试剂；复合物剧烈震荡；冻存转染试剂

4. 有效期：未开封2年，开封后4℃可稳定使用6个月

七、Cas9 RNP转染简易适配（拓展用法）

1. sgRNA+Cas9蛋白先用Opti-MEM混合孵育10min形成RNP

2. RNP稀释液再与稀释后的RNAiMAX混合，室温20min成复合物，后续步骤同正向转染

公司常备现货产品目录：

Millipore 发光液

WBKLS0100 100ml

WBKLS0500 500ml  

Gibco B27

17504-044 10ml

12587010 10ml  

A1895601 10ml  

Gibco

双抗 15140122-100ml

三抗  15240062-100ml

胰酶

25200056 100ml  

15400054  100ml

25300054  100ml

N-2添加剂

17502048 5ml  

胰岛素

51300044 10ml  

41400045 10ml   

51500056 10ml  

L-谷氨酰胺  25030081-100ml

GlutaMAX  补充剂  35050061-100ml

MEM 非必需氨基酸溶液11140050-100ml

Trizol

15596026CN 100ml   

15596018CN 200m   

TRIzol LS

10296010CN 100ml  

10296028CN 200ml