LAD2细胞、LAD 2细胞、LAD-2细胞操作步骤

LAD2细胞、LAD 2细胞、LAD-2细胞操作步骤

产品名称：LAD2细胞、LAD 2细胞、LAD-2细胞

中文名称：人肥大细胞肉瘤/白血病细胞

细胞来源：骨髓

疾病 ：肥大细胞肉瘤/白血病

传代比例： 1：2传代，消化2-3分钟，

培养环境： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

完培配置： 该细胞系培养所用培养基为 LAD-2细胞专用培养基。；推荐使用HAKATA培养基，W-P-500;

细胞形态： 上皮细胞样

生长特征： 悬浮生长

倍增时间： ~12-15天

冻存条件： 冻存液：90%FBS，DMSO 10%,或推荐HAKATA H-W-100

保藏机构： ABM; T8157

细胞接收：
1：观察有无破损漏液情况 ，如有请拍照及时联系客服。

2 ：酒精消毒培养瓶表面后显微镜下观察细胞状态 ，观察拍照后不用打开培养瓶盖 ，放入培养箱静止

2- 3小时稳定细胞状态。

3 ：请按照细胞操作指南进行第一次传代冻存处理。

4 ：产品随货会附带细胞说明书、细胞培养操作指南。

5 ：若产品有异常或其他疑问 ，可随时联系客服

6.收到后，培养条件(完培配置)需跟保持一致，如有变动销售另行告知

仅限于科学研究 ，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

悬浮细胞接收后的处理：

1. 收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-4h，若发现培养瓶破损 、有液溢出及细胞有污染 ，请拍照后及时联系我们

2. 静置完成后，请在显微镜下确认细胞状态 ，同时给刚收到的细胞拍照(10x ，20x)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据 。

3. 悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中，(加入按照说明书细胞培养条件新配制的培养基) 。

备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞 。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。

悬浮细胞的复苏、传代、冻存步骤：

1. 悬浮细胞复苏:从液氮灌中或-80℃C冰箱中查找到需要复苏的细胞，水浴锅提前打开预热37℃℃

2. 复苏细胞:从液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要复苏的细胞，水浴锅提前打开预热 37℃;1)将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻;

3. 加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀;

4. 弃去上清液，培养基重悬细胞 。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基接种于 T25 培养瓶中(或6cm 皿中) ，培养guo夜，第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度 。

悬浮细胞传代:如果细胞密度达80%-90% ，即可进行传代培养 。方法一:将细胞悬液收集到离心管中1000rpm， 离心5min ，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力 。方法二:半换液处理，竖着培养瓶在培养箱静置10-20min 左右 ，肉眼可见大部分细胞沉在底部;轻轻吸掉 3ml左右培养基，将剩余细胞悬起混匀;

5. 将细胞悬液按 1:2到 1:3 的比例分到新的含 5-6 m 培养基的培养皿中或者培养瓶中，一般这样传代3次左右可以离心传代一次

悬浮细胞冻存:

1.收集瓶内所有细胞悬液吸至离心管，如悬浮细胞贴壁需要把贴壁的细胞吹下来一起收集离心，可使用血 球计数板计数，来决定

2. 细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1x10^6~1x107个活细胞/ml;2)1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1x10^6~1x107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称 、代数 、日期等信息;

3.按冻存数量加入无血清冻存液后直接放-80℃冰箱过夜，后续可转入液氮罐中长期保存。

LAD2细胞增殖速度较慢，2-3周发货，请老师下单后准备好培养条件，如需更多细胞株细胞系、原代细胞、耐药株、永生化细胞、IPS诱导细胞等，请联系上海慧颖生物市场部。