LS8 小鼠成釉细胞(牙釉质)培养说明

                                                                          LS8 小鼠成釉细胞(牙釉质)培养说明

产品货号ALWS-1847

产品规格T25

细胞背景：LS8 细胞是一种小鼠成釉细胞样细胞系，来源于瑞士韦伯斯特（CFW）小鼠的牙釉质器官的牙上皮，是由猿猴空泡病毒 40（SV40）转化而来的细胞系，其 NCBI 分类学编号为 1891767。

细胞形态：形态：上皮细胞样，贴壁生长（不牢固，易脱落）。

用途：仅供科研使用。

培养条件：1） 准备 DMEM（A19008）培养基；胎牛血清PRO MAX(HB-FBS-500)，10%；双抗(H8611)，1%。

2） 培养条件： 空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为 70%-80%。

该细胞培养过程中贴壁不牢固容易脱落并聚团的特性，培养过程中需要注意：每次重铺的前 12 小时尽量减少震动，需要安安静静的等细胞贴壁。消化过程中 PBS 润洗后，加入 1ml 0.25%EDTA 的胰酶消化大约 1 分钟左右，拿出培养箱震荡，拍打瓶底和侧面，帮助脱落，如有细胞团块较大，可以通过枪头吸取消化液轻轻的吹打的方式分散开，避免距离太近冲击力过大对细胞产生损伤，待细胞分散成单细胞悬液后，3ml 完培终止消化，再离心重悬后铺瓶。

贴壁细胞参考：

一.消毒静置等细胞稳定后拍照 100X 和 200X。弃去培养上清，用 PBS 润洗细胞 1-2 次并吸走。

二. T25 瓶加入 0.25％EDTA 胰蛋白酶 1-2ml 于培养瓶中震荡混匀，如果属于贴壁不牢固的细胞很容易脱落的就培养箱外面消化震荡待脱落 90%以上终止消化，一般小于 1 分钟以内，甚至不加胰酶有部分贴壁非常不牢固的细胞也会自然震荡脱落。如果是贴壁牢固的细胞则置于 37℃培养箱中消化提高效率，每 40-50 秒拿出培养箱震荡帮助细胞脱落，如脱落 90%以上则对应 3-6ml 含有 10%血清的培养基终止，以防胰酶残留损伤细胞。如果贴壁非常牢固的细胞，脱落的比例比较低，也不超过 2 分钟后终止消化，再加入 1ml 培养基让细胞缓冲后再过2 分钟进行二次消化，反复分步消化以降低单次消化时长，减少刺激，保护细胞膜。或采用刮产刮细胞的方式处理也可以。总归原则是达到消化目的的同时减少细胞膜受到的损伤越小越好。

三.消化完成后轻轻吹匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培养皿中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2 和以上比例进行，具体以实际细胞密度决定。期间多的细胞一定保存多份细胞冻存管备种。

这株细胞长势很块

 上述为LS8细胞实时出库图