HuH-7细胞培养说明

HuH-7细胞培养说明

HuH-7细胞，人肝癌细胞

产品货号ALWS-058

产品规格T25

1、贴壁细胞 上皮样 HuH-7细胞来自患有肝癌的57岁日本男性肝脏，据报道可产甲胎蛋白、胰酶α抗体、血浆铜蓝蛋白、纤维蛋白原、纤维粘连蛋白等。

2、DMEM培养基；10%胎牛血清；1%双抗 复苏5-7天，冻存次日发货

3、STR原始数据图谱，支原体、真菌、细菌检测报告 T25瓶80%密度提供发货照片；≥1*106冻存管2支；二选一 1、提供代数靠前细胞 2、公司常年有不同买馈赠等活动形式 3、价格优势 4、售后服务到位，专业技术一对一操作指导

贴壁细胞接收注意事项：                                                        贴壁细胞经过快递运输颠簸会出现漂浮脱落等情况： 收到先放培养箱静置稳定。如有脱落需收集处理，处理细节请查阅以下信息，原瓶内为运输培养液，血清含量只有5%，需及时更换专用培养基。

收到细胞后请把细胞图片状态发给同事， 根据图片可以给出接下来的处理建议（传代或者换液），建议一比二传代至2个T25。

贴壁细胞传代步骤：
准备工作：胰酶和培养基（需要提前37度复温）、PBS（常温）避免细胞遇冷受刺激

（1） 吸出原培养液

（2） 加入2ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃

（3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞。

（4） 根据不同的细胞放入培养箱时及时关注消化时间，消化约2-3min，显微镜下看到细胞中间的细胞明显分离变圆细胞间隙变大，显微镜下看细胞呈单个游离状态，侧立培养瓶细胞可以滑落时可终止消化，可以轻拍培养瓶侧身。（消化时主要看消化状态，如果没有变圆，侧立时不能滑落时，可以适当延长消化时间，每30s观察一次细胞）

（5） 加入3ml含10%血清的培养基终止消化，轻轻吹打细胞使之脱壁并在液体里反复轻轻吹打（不要太用力）使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液。

（6） 收集细胞悬液离心，1000rpm/min（约250g）  5分钟，离心完吸出上清丢弃。

（7） 加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞即可，按需接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。

（8） 检查培养箱二氧化碳，温度和水盘。

这个是贴壁细胞传代的方法，特别注意的是第4步消化过程，消化至到细胞wan全变圆以后侧立培养瓶细胞可以出现滑落时再终止消化。

后续处理建议：传代后2-3天换液一次即可，（如细胞第二天全部贴壁培养基颜色变黄，可以换液，）无需每天换液（换液太勤可能会损失细胞影响细胞状态）换液时候如果没有特殊情况也可以不用PBS清洗

上图为出库实时拍照图