小鼠骨髓间充质干细胞操作步骤

小鼠骨髓间充质干细胞操作说明

种属：小鼠

组织来源：正常骨髓血组织

传代比例：1:2传代

培养基配置：基础培养基500ml；生长添加剂5ml；胎牛血清50ml；双抗5ml

简介 骨髓间充质干细胞是骨髓基质干细胞，对骨髓中的造血干细胞（HSC）不仅有机械支持作用，还能分泌多种生长因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）来支持造血。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)具有多向分化潜能，能促进间充质组织的再生，如：骨、软骨、肌肉、韧带、肌腱、脂肪及基质等组织。在骨髓中，BMSCs占骨髓有核细胞总数的0.001%~0.1%，含量极低。而同时，由于组织工程需要大量的种子细胞，从啮齿类动物骨髓分离BMSCs的技术上的难度限制了许多实验的开展。体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的BMSCs对组织工程及细胞的体内、体外实验显得至关重要。

形态：长梭形细胞样，不规则细胞样

生长特征：贴壁生长

细胞检测：CD44免疫荧光染色为阳性免疫荧光鉴定，细胞纯度可达90%以上，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

倍增时间：每周 2 至 3 次

换液频率： 2-3天换液一次

培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

冻存条件：冻存液：90%FBS，DMSO 10%, 或使用非程序冻存液：货号H-W-50/100

产品使用：于科学研究，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

细胞接收处理流程：

1：观察有无破损漏液情况，如有请拍照及时联系客服。

2：酒精消毒培养瓶表面后显微镜下观察细胞状态，观察拍照后不用打开培养瓶盖 放入培养箱静止2-3小时稳定 细胞状态。

3：请按照细胞操作指南进行次传代冻存处理。

4：产品随货会附带细胞说明书、细胞培养操作指南、细胞鉴定、支原体检测报告。

5：若产品有异常或其他疑问，可随时联系客服；转至技术支持。

常温细胞收货当天处理方式

1.收到常温细胞后，及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。

2. 镜下观察有无微生物污染现象，拍照记录不同倍数镜下细胞状态和有无染菌现象， 方便后续售后处理。

3. 消毒后，更换赠送的培养液放置培养箱静止2-3小时。如细胞有多数悬浮细胞需要离心收集重新接种止培养瓶。

4. 观察细胞密度若超过 80%则可正常传代处理(有的原代细胞不可传代，请根据实际情况决定)，传代推荐比例 1：2 到 1：3（按实际收货细胞密度决定，若不确定 可联系技术支持）；若细胞密度不到 80%则可继续培养，注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖；悬浮细胞注意离心所有培养基以收集细胞。

5. 由于气温，运输等影响造成贴壁细胞漂浮的，请将细胞离心收集后在离心管中消化后进行传代（参考附件），或及时联系技术支持进行指导传代。

贴壁细胞传代：1.从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃；

2.从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液以避免搅动细胞层，前后摇晃容器数次

3. 从培养容器中吸出冲洗液并丢弃，向培养瓶中加入预热的胰酶；胰酶量应足以覆盖细胞层 (T25为1ml)；

4.将培养容器在室温下孵育约 2分钟（请注意实际孵育时间根据所用细胞系不同而有所差异）；

5.在显微镜下观察细胞解离情况；如果解离程度未达 90%，可将孵育时间延长几分钟，每 30 秒钟检查一次解离情况；

6.细胞解离程度大于等于 90%时，倾斜培养容器，使细胞上液体尽快流尽；加入所用解离剂两倍体积的预热生长培养基；吹打细胞层表面数次，使培养基分散；

7.将细胞转移到15mL 无菌离心管中，以 200×g 的离心力离心 3-5 分钟 （请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异）；

8.用最少体积的预热生长培养基重新悬浮细胞沉淀，将细胞悬液按照推荐比例稀释，并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中，把细胞放回培养箱（注：如果使用培养瓶，将其放入培养箱前应将瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换，除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖）。

悬浮细胞传代：将 T25 培养瓶中的悬液收集至离心管中 1000rpm 离心 5min，收集上清，加 1-2ml 培养基重悬，按 1:2 比例进行比例传代分到新T25瓶中，补充5-8ml/瓶新的培养基 ，最后放入细胞培养箱中培养。