MOTN-1细胞操作步骤

MOTN-1细胞，人T细胞大颗粒淋巴细胞白血病细胞

种属：人

组织来源: 外周血（Peripheral blood）

疾病: T细胞大颗粒淋巴细胞白血病（T-cell large granular lymphocyte leukemia）

年龄: 65岁（65 years）

性别: 女（Female）

细胞类型: 淋巴细胞样（Lymphocyte-like）

生长特性: 悬浮生长（Suspension）

收到培养瓶中细胞操作步骤：

对于悬浮培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培养瓶，以减少产品运输过程中细胞所受震荡。

1. 收到细胞产品后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。

2. 将培养瓶竖直放置于37℃培养箱中直至温度平衡，随后，在生物安全柜中，转移培养瓶中的细胞至离心管中，离心200×g / 5 -10 min，去除上清后，用5mL培养基吹散细胞。

3. 对上述细胞悬液进行细胞计数及活力检测，调整细胞密度至2- 3*10的5次方，并转移至新的培养瓶中。

4. 将培养瓶竖直放置于含有5% CO 的37℃恒温培养箱中培养。如果细胞达到传代培养的密度，则进行传代培养。

收到冻存细胞操作步骤：

注意：为保存细胞的高存活率，请收到产品后，立即解冻培养。

1.将冻存管置于37℃ 水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约2分钟。

2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用 70%酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。

3.将冻存管中的液体转移到含有5mL培养基的离心管中， 离心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有冻存液的上清。

4. 用培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。

5、将细胞置于含有5% CO 的37℃恒温培养箱中培养。

悬浮细胞传代培养：

悬浮细胞的传代可通过补加或置换新鲜培养基的方式来完成，

具体做法如下：

1. 取出少量细胞悬液进行细胞计数及活力检测，当细胞密度达到 ×106 cells/mL 时，进行细胞传代培养。

2. 取足量细胞加入到盛有新鲜培养基的培养瓶中，将细胞密度维 持在 ×105 cells/mL。

3. 将培养瓶竖直放置于含有5% CO 的37℃恒温培养箱中培养。如果细胞达到传代培养的密度，则进行传代培养。

培养基换液: 每隔 2 至 3 天。

培养基配制：

该细胞系培养所用基本培养基为 RPMI1640,配置培养基时需加入10%FBS，100 U/mL IL-2,1%Anti-Anti。