半贴壁半悬浮细胞接收注意事项

半贴壁半悬浮细胞接收注意事项

半贴壁半悬浮细胞接收注意事项：                                                                            半贴细胞和贴壁不牢细胞：经过快递运输颠簸会出现漂浮脱落等情况。收到T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。

半贴壁半悬浮细胞传代步骤：
准备工作：胰酶和培养基（需要提前37度复温）、PBS（常温）避免细胞遇冷受刺激                                                    （1） 吸出原培养液至离心管内（里面是正常悬浮细胞不可丢弃）            （2） 加入2ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃            （3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞。    （4） 根据不同的细胞放入培养箱时及时关注消化时间，消化约2-3min，显微镜下看到细胞中间的细胞明显分离变圆细胞间隙变大，显微镜下看细胞呈单个游离状态，侧立培养瓶细胞可以滑落时可终止消化，可以轻拍培养瓶侧身。（消化时主要看消化状态，如果没有变圆，侧立时不能滑落时，可以适当延长消化时间，每30s观察一次细胞）    （5） 加入3ml含10%血清的培养基终止消化，轻轻吹打细胞使之脱壁并在液体里反复轻轻吹打（不要太用力）使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液。                （6） 收集细胞悬液至悬浮细胞离心管内一起离心1000rpm/min（约250g）  5分钟，离心完吸出上清丢弃。                                    （7） 加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞即可，按需接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。

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