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人桥连整合因子1(BIN1)ELISA试剂盒说明书

发布时间:2012-11-01浏览:1629次

中文名称:人桥连整合因子1(BIN1)ELISA试剂盒

英文名称:Human Bridging Integrator 1 (BIN1)ELISA Kit

别名:人桥连整合因子1(BIN1)酶免试剂盒;人桥连整合因子1(BIN1)ELISA 检测试剂盒

规格:96T

关于 人桥连整合因子1(BIN1)ELISA试剂盒说明书  详情如下:

试剂盒技术参数:

试剂盒性能:1.样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.92 以上。

            2.批内与批间应分别小于9%和15%

检测范围:5pg/ml -180pg/ml

保存条件:2-8°C

有效期:6个月

样本处理及要求:

1. 血清:室温血液自然凝固10-20 分钟,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上

清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心

20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次

离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程

中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞

浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备

用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器

将标本匀浆充分。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待

检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上

进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

检测目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中桥连整合因子1(BIN1)含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人桥连整合因子1(BIN1)水平。用纯化的人桥连整合因子1(BIN1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入桥连整合因子1(BIN1),再与HRP 标记的桥连整合因子1(BIN1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的桥连整合因子1(BIN1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人桥连整合因子1(BIN1)浓度。

试剂盒组成:

试剂盒组成48 孔配置96 孔配置保存

说明书1 份1 份

封板膜2 片(48) 2 片(96)

密封袋1 个1 个

酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存

标准品:270pg/ml 0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存

标准品稀释液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存

酶标试剂3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

样品稀释液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

显色剂A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

显色剂B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

终止液3ml×1 瓶6ml×1 瓶2-8℃保存

浓缩洗涤液(20ml×20 倍)×1 瓶(20ml×30 倍)×1 瓶2-8℃保存。

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10 孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉,再各取50μl 分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180pg/ml, 120pg/ml,60pg/ml,30pg/ml, 15pg/ml)。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液:将30(48T 的20 倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T 的20 倍)倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

注意事项:

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔*孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.   封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6. 底物请避光保存。

7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9. 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

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