ELISA试剂盒整个操作程序总结

1.标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：
 12μg/L （5号标准品） 120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液
6μg/L （4号标准品） 120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液
3μg/L （3号标准品） 120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液
 1.5μg/L （2号标准品） 120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液
 0.75μg/L （1号标准品） 120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液
2.分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl；在3.酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。  
4.弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。
5.每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。 
6.弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。
7.每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
8.取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9.测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来10.计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。