ELISA试剂盒做试验时不注意会出现怎样的差错

　　在现在的ELISA试剂盒中，血清样本的加入几乎是*的要使用微量加样器加入样本的步骤。

    使用微量加样器加样必须注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。

    试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。

    所以，有时候一份标本用相同的elisa试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。

    ELISA试剂盒竞争法
    在竞争法ELISA中，阴性孔呈色深于阳性孔。阴性呈色的强度取决于反应中酶结合物的浓度和加入竞争抑制物的量，一般调节阴性对照的吸光度在1.0-1.5之间，此时反应zui为敏感。

    竞争法ELISA不易用自视判断结果，因肉眼很难辨别弱阳性反应与阴性对照的显色差异，一般均用比色计测定，读出S、P和N的吸光值。计算方法主要也有两种，即阳性判定值法和抑制率法。

    a. 阳性判定值法

    与间接法和夹心法中的阳性判定值法基本相同，但在计算公式中引入阳性对照A值，现举某种检测抗HBc的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照为不含抗HBc的复钙人血浆，阳性对照中抗HBc含量为125±100u/ml.每次试验设2个阳性对照和3个阴性对照。测得A值后，先计算阴性对照A值的平均值（NCX）和阳性对照A值的平均数（PCX），两个平均数的差（N-P）必须大于一个特定的数值（例如0.300），试验才有效。3个阴性对照A值均应小于2.000，而且应≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范围，则弃去，而以另2个阴性对照重新计算×NCX；如有2个阴性对照A超出以上范围，则该次实验无效。阳性判定值按下式计算：

    阴性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX

    标本A值≤阳性判定值的反应为阳性，A＞阳性判定值的反应为阴性。

    b. 抑制率法

    抑制率表示标本在竞争结合中标本对阴性反应显色的抑制程度，按下式计算：

    抑制率（%）= （阴性对照A值-标本A值）×100%/阴性对照A值

    一般规定抑制率≥50%为阳性，＜50%为阴性。