人甲胎蛋白（AFP）ELISA试剂盒说明书（定量）

产品名称：人甲胎蛋白（AFP）ELISA试剂盒

方法：ELISA定量

规格：96T

产地：美国* 若想知道品牌请致电： ！

一、试剂盒的组成

1．兔抗AFP包被的微孔板：96孔，1块；

2．零缓冲液：1瓶，13mL；

3．冻干参照标准品：1套（0，20，50，150，500和1000ng/mL）；

4．酶联试剂：13 mL；

5．TMB试剂（一步）：1lmL；

6．终止液（1N HGL）：1lmL。

二、自备材料

1．精密吸管：0.02，0.05，0.10，0.15，0.20和1.0mL；

2．一次性吸管吸头；

3．蒸馏水；

4．涡旋混合器或等同物；

5．吸水纸或纸巾；

6．坐标纸；

7．酶标仪。

三、样品的采集和制备

    按规定的医学技术要求从获得的全血样品中制备血清，此试剂盒仅使用血清样品，且无任何添加剂。

四、试剂盒的保存和仪器

未启封的试剂盒须保存在2~8℃的环境下；微孔板存放在有干燥剂的密封袋里，以尽量减少其在潮湿空气中的暴露；已启封的试剂盒在上述保存条件下，在有效期内可保持稳定。用酶标仪在450nm处测定吸收值时，要求谱宽≤10nm，光密度值O.D.在0~2间或更大些。

五、试剂准备

1．检测前使所有试剂达到室温（18~25℃，下同）。

2．用0.5mL蒸馏水溶解每个冻干的标准品（至少需20分钟）并轻轻混合。已溶解的标准品须在2~8℃下密封保存。

六、检测步骤

1．把所需数量的微孔固定在支架上。

2．分别吸取10µL标准品、样品和稀释对照品加入相应微孔。

3．将100µL零缓冲液分别加入到每个微孔中。

4．充分混合30秒钟（此步充分混合至关重要）。

5．室温温育30分钟。

6．翻转微孔架，弃掉温育混合物。

7．用蒸馏水或去离子水冲洗微孔5次。

8．在吸水纸或纸巾上扣击微孔板以*除去微孔中残余的水滴。

9．向每个微孔中分别加入100µL的酶联试剂，轻轻混合5秒钟。

10．室温温育30分钟。

11．翻转微孔架，弃掉温育混合物。

12．用蒸馏水冲洗微孔5次（请勿使用自来水）。

13．在吸水纸上扣击微孔板以除去残余的水滴。

14．向每个微孔中分别加入100µL的TMB试剂，轻轻混合5秒钟。

15．室温温育20分钟。

16．向每个微孔加入100µL终止液（1N HCL）终止反应。

17．轻轻混合30秒钟（此步对确保蓝色*变成黄色至关重要）。

18．在15分钟内用酶标仪在450m处读出光密度值。 

七、结果计算

1．计算出每个参照标准品、样品、对照品和患者样品的平均吸收值（A450）。

2．以每个参照标准品的平均吸收值作纵轴（Y），浓度值（ng/mL）作横轴（X）在坐标纸上绘制出标准曲线。

3．根据每个样品的平均吸收值，在标准曲线上找出相应的AFP浓度值（ng/mL）。

八、标准曲线实例

    在450nm处以Y轴上显示的吸收值，X轴上显示的AFP浓度值得出典型的标准曲线。此标准曲线仅用于说明，不能用于计算未知样品。每个使用者应根据自己的数据制作标准曲线。 

九、期望值和灵敏度

 在高危患者血清中，用本试剂盒所测得的AFP值在100~350ng/mL之间可诊断为肝细胞癌。其AFP水平超过350ng/mg，通常表明已患病。大约97％的健康受试者AFP水平低于8.5ng/mL。本试剂盒可检测的AFP的zui小浓度为2.0ng/mL。