使用豚鼠白介素1受体拮抗剂（IL1Ra）ELISA试剂盒操作步骤

　　样本处理及要求：
　　
　　1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离

心。
　　
　　2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集

上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
　　
　　3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水

、脑脊液参照实行。
　　
　　操作步骤：
　　
　　1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加

标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液

50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准

品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μ

l，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中

各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60ng/L，40ng/L，20ng/L，10ng/L，5ng/L）。
　　
　　2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先

加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动

混匀。
　　
　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
　　
　　4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
　　
　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
　　
　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
　　
　　注意事项：
　　
　　1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
　　
　　2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
　　
　　3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推

荐使用排枪加样。
　　
　　4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样

品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
　　
　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
　　
　　6．底物请避光保存。
　　
　　7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
　　
　　8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
　　
　　9．本试剂不同批号组分不得混用。

　　实验原理：
　　
　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中豚鼠白介素1受体拮抗剂（IL1Ra）水平。用纯化的豚鼠白介素1受体拮抗剂（IL1Ra）抗体包

被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素1受体拮抗剂（IL1Ra），再与HRP标记的IL1Ra抗体结合，形成抗体-抗

原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色

的深浅和样品中的白介素1受体拮抗剂（IL1Ra）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中豚鼠

白介素1受体拮抗剂（IL1Ra）浓度。