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人小细胞肺癌细胞NCI-H196操作方法

发布时间:2024-06-19浏览:106次

人小细胞肺癌细胞NCI-H196操作法
1×10⁶cells/T25培养瓶
培养条件:RPMI1640培养基;10%胎牛血清;1%双抗

常温细胞收货当天处理方式

1.收到常温细胞后,及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。

2. 镜下观察有无微生物污染现象,拍照记录不同倍数镜下细胞状态和有无染菌现象, 方便后续售后处理。

3. 消毒后,更换赠送的培养液放置培养箱静止2-3小时。如细胞有多数悬浮细胞需要离心收集重新接种止培养瓶。

4. 观察细胞密度若超过 80%则可正常传代处理(有的原代细胞不可传代,请根据实际情况决定)传代推荐比例 12 13(按实际收货细胞密度决定,若不确定 可联系技术支持);若细胞密度不到 80%则可继续培养,注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖;悬浮细胞注意离心所有培养基以收集细胞。

5. 由于气温,运输等影响造成贴壁细胞漂浮的,请将细胞离心收集后在离心管中消化后进行传代(参考附件),或及时联系技术支持进行指导传代。

贴壁细胞传代:1.从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃;

2.从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液以避免搅动细胞层,前后摇晃容器数次

3. 从培养容器中吸出冲洗液并丢弃,向培养瓶中加入预热的胰酶;胰酶量应足以覆盖细胞层(T251ml)

4.将培养容器在室温下孵育约 2分钟(请注意实际孵育时间根据所用细胞系不同而有所差异);

5.在显微镜下观察细胞解离情况;如果解离程度未达 90%,可将孵育时间延长几分钟,每 30 钟检查一次解离情况;

6.细胞解离程度大于等于 90%时,倾斜培养容器,使细胞上液体尽快流尽;加入所用解离剂两倍体积的预热生长培养基;吹打细胞层表面数次,使培养基分散;

7.将细胞转移到15mL 无菌离心管中,以 200×g 的离心力离心 3-5 分钟(请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异);

8.用最少体积的预热生长培养基重新悬浮细胞沉淀,将细胞悬液按照推荐比例稀释,并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中,把细胞放回培养箱(注:如果使用培养瓶,将其放入培养箱前应将瓶盖旋松,以便进行充分的气体交换,除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖)。

悬浮细胞传代:将 T25 培养瓶中的悬液收集至离心管中 1000rpm 离心 5min,收集上清,加 1-2ml 培养基重悬,按 1:2 比例进行比例传代分到新T25瓶中,补充5-8ml/瓶新的培养基 ,最后放入细胞培养箱中培养。

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