怎么去培养人骨肉瘤细胞？

 　　人骨肉瘤细胞又称为HOS细胞。它可在无血清的状态下培养。对于HOS细胞中的肿瘤干细胞相关亚群可以进行筛选和鉴定人骨肉瘤细胞系。方法通过无血清悬浮培养初步富集骨肉瘤细HOS肿瘤干细胞，观察其形成肿瘤干细胞球过程中的细胞形态，并在有血清培养基中诱导其分化。结论无血清悬浮培养可以初步富集人骨肉瘤细胞系HOS悬浮细胞球，且这些细胞具有肿瘤干细胞特性。

　　(HOS细胞)人骨肉瘤细胞培养方法：

　　收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

　　如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml培养液继续培养。

　　如果细胞已长满(达80-90%)。即可进行传代，具体步骤如下：

　　a，弃去培养液，用PBS洗1-2次。

　　b，向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有6ml 含10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

　　c，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

　　d，传代比例：1:2-1:3
 

　　温馨提示：培养瓶里面的培养液是加入zui高药物浓度的，为800ng/ml。我们采取缓慢增加药物的梯度的方法。具体步骤是，首先加含200ng/mlTaxol药物的培养液，放入培养箱，这段时间会有小部分细胞悬浮起来，属于正常情况，通过换液可以去掉，等细胞待长满就可以消化传代了，这时可以一直用含药物培养液来消化培养细胞，一两代之后就可以将药物浓度提高到500ng/ml，两代后可以将药物浓度提高至zui高水平800ng/ml，含药物培养液用于细胞培养都没有问题，冻存的时候就不要在冻存液里加药物了。

　　(HOS细胞)人骨肉瘤细胞保存和应用：

　　客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。