MDA-MB-231细胞MDA-MB-231培养步骤

MDA-MB-231细胞MDA-MB-231培养步骤

     上海慧颖生物科技有限公司

一、细胞培养条件

二、细胞收到后处理

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满*培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的*培养液收集至离心管中，加入6ml*培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）

三、细胞培养步骤

1. 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL*培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养隔夜。第二天换液并检查细胞密度。
2. 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的*培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，*脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右*培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。

售后服务告知书

一、收到细胞处理方法

1. 收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置若干小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100×，200×各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行售后的依据。

2. 收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费重发一次细胞。

3. 由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素的影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后是需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后与客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。

4. 如客户对细胞的种类、纯度、活性等特性有疑问，需提供相应的生物学实验检测结果作为依据。

二、细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；

3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；

5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；

6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。

三、细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

1. 客户造成细胞污染，不重发；

2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；

3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；

5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；

6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；

7. 视具体情况而定。