RAW264.7细胞形态，RAW264.7细胞株操作说明

RAW264.7细胞形态，RAW264.7细胞株操作说明RAW264.7细胞形态

操作说明：

收到细胞后，在倒置镜下(是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。

（一）  如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量*培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加*培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的次传代一般是一传二。

注：1、观察细胞在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们联系。

运输保存：

采用干冰保存运输。收到细胞时，若干冰已经*融化，请立即将细胞复苏培养；若尚留有干冰，请立即将细胞放入液氮中保存待用，请按条件贮存细

胞，切不可将细胞置于高温环境。

注意事项

1 ）操作前要洗手，进入超净台后手要用 75% 酒精或 0.2% 新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。

2 ）点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具

不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。

3 ）操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。

4 ）不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。

5 ）瓶子开口后要尽量保持 45℃ 斜位。

6 ）吸溶液的吸管等不能混用 。

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BAF3、BA/F3 小鼠原B细胞株  RPMI-1640+10% FBS+10ng/ml IL-3 悬浮    淋巴母细胞

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C17.2   小鼠神经干细胞  DMEM+10%FBS 贴壁    成纤维细胞

C3H/10T1/2, Clone 8 小鼠胚胎成纤维细胞  MEM+10%FBS  贴壁    成纤维细胞

RENCA   小鼠肾癌细胞    1640+10%FBS+0.1mM 非必需氨基酸+1mM 丙酮酸钠+2mM L-谷氨酰胺+1%P/S    贴壁    上皮细胞样

IMCD3   小鼠肾脏内髓集合管3上皮细胞    DMEM/F12+10%FBS 贴壁    上皮细胞样

MB49    小鼠膀胱癌细胞  DMEM+10%FBS 贴壁    上皮细胞样