ALPHATC1CLONE6 细胞株复苏失败原因分析

ALPHATC1CLONE6 细胞株复苏失败原因分析

慧颖生物热卖，细胞株状态良好，饱满，光泽度好，活力强，传代次数少，*！

产品名称：ALPHATC1CLONE6 细胞

中文名称：鼠胰岛素瘤胰岛a细胞

种属：小鼠

来源：胰岛素瘤；a细胞；C57BL/6xDBA/2

培养条件：DMEM

生长状态：贴壁

ALPHATC1CLONE6 细胞株复苏失败原因分析

细胞的冻存与复苏

为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，*的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(－70℃~－196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在－70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于*停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。

一、细胞的冻存：为避免污染造成的损失，zui小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。

有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下：

包含10％甘油的*培养基，

包含10％二甲基亚砜（DMSO）的*培养基，

50％ 细胞条件培养基和50％含有10％甘油的新鲜培养基，或

50％ 细胞条件培养基和50％含有10％二甲基亚砜的新鲜培养基。

对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是：

50％ 细胞条件无血清培养基和50％包含有7.5％二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基，或

包含有7.5％二甲基亚砜和10％细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。ALPHATC1CLONE6 细胞株复苏失败原因分析

SW1990   人胰腺癌细胞         人     胰腺癌；男性         L15   贴壁

RPMI8226        人多发性骨髓瘤细胞     人     骨髓瘤；男性         1640         悬浮

HMrSV5   人腹膜间皮细胞     人     腹膜间皮细胞         1640         贴壁

MEG-01   人成巨核细胞白血病细胞     人     慢性髓细胞性白血病；男性         1640         悬浮

CCD-18Co         正常人结肠成纤维细胞         人     结肠；成纤维细胞；女性     EMEM      贴壁

KGN 人卵巢颗粒细胞     人     卵巢；颗粒细胞；女性         DMEM     贴壁

HCC70      人乳腺导管癌细胞         人     乳腺导管癌；女性         DMEM     贴壁

C3A  人肝母细胞癌细胞         人     肝母细胞癌；男性         IMDM      贴壁

QBC939   人胆管癌细胞         人     胆管癌     1640         贴壁

Leydig       猪睾丸间质细胞     猪     睾丸；间质细胞     DMEM     贴壁

BPH-1       人前列腺增生细胞         人     良性前列腺增生；男性         1640         贴壁

WML2      小鼠肺成纤维细胞         小鼠         肺；成纤维细胞     DMEM     贴壁

Hs578Bst          人正常乳腺细胞     人     乳腺细胞         1640         贴壁

HCASMC  人冠状动脉平滑肌细胞         人     冠状动脉平滑肌     DMEM     贴壁

HSC-3       人口腔鳞癌细胞     人     舌鳞癌；男性         EMEM      贴壁

CA9-22     人口腔上皮癌细胞         人     牙龈鳞癌；男性     DMEM     贴壁

MHCC97H        人高转移性肝癌细胞     人     肝癌；高转移；男性     EMEM      贴壁

SSP-25      人肝胆管癌细胞     人     肝内胆管癌；女性         DMEM     贴壁

JeKo-1      人套细胞淋巴瘤细胞     人     套细胞淋巴瘤；女性     1640         悬浮

MCF-10A 人正常乳腺上皮细胞     人     乳腺；上皮细胞；自发永生；男性     1640         贴壁

BeWo        人胎盘绒毛癌细胞         人     妊娠性绒癌     EMEM      贴壁

MOVAS     小鼠主动脉平滑肌细胞         小鼠         主动脉平滑肌；SV40转化；C57BL/6  DMEM     贴壁

MA-104    猴胎肾细胞     猴     胚肾；自发永生     DMEM     贴壁

LAD2         人肥大细胞     人     肥大细胞         1640         悬浮

HMC-1     人肥大细胞     人     肥大细胞         IMDM      悬浮

NCI-H1299       人非小细胞肺癌细胞     人     大细胞肺癌；淋巴结转移；男性         1640         贴壁

IPEC-J2     猪小肠上皮细胞     猪     小肠；上皮细胞；自发永生         1640         贴壁

MARC-145        猴胚胎肾上皮细胞         猴     胚肾；自发永生     DMEM     贴壁

冻存细胞的复苏:冻存细胞较脆弱，要轻柔操作。冻存细胞要快速融化，并直接加入*生长培养基中。若细胞对冻存剂（DMSO或甘油）敏感，离心去除冻存培养基，然后加入*生长培养基中。

1、直接铺板方法

取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化。

直接用*生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml*生长培养基。进行活细胞计数，细胞接种应该至少在3×10⁵活细胞/ml。培养细胞12到24小时，更换新鲜的*生长培养基，去除冻存剂。

2、离心方法

取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化。

把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml*生长培养基，轻轻混匀。

以大约80x g离心2到3分钟。

弃去上清。

在*生长培养基轻轻再次悬浮细胞，并且进行活细胞计数。

细胞铺板，细胞接种应该至少为3×105活细胞/ml。

三、细胞的分化、衰老与死亡

1、细胞的分化:一个成年人全身细胞总数约1012个，可以区分为200多种不同类型的细胞：形态结构，代谢，行为，功能等各不相同。追根溯源，这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以，通常把发育过程中，细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段，也发生在胎儿出生以后，乃至成人阶段。例如，人体血细胞的产生和分化，这个过程在人的一生中一直持续着。

由旺盛生长不断分裂的细胞，转入分化，通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞，它们的基因表达和代谢活动各不相同。

2、细胞的衰老:体外细胞培养实验证明：

成纤维细胞：来自胎儿传代50次后衰老死亡,来自成人传代20次后衰老死亡(与具体年龄有关);来自小鼠传代14--28次后衰老死亡,来自乌龟传代90--125次后衰老死亡。

细胞衰老过程中会发生一系列的变化，包括：蛋白质合成速度降低，已有蛋白质结构变化，特异蛋白质成份出现；同时，细胞核，线粒体，膜系统、骨架系统等都有结构、功能的改变。

细胞衰老原因，尚无定论，出现过好几种理论与假说，其中得到较广泛认可的是“自由基损伤假说”。

3、细胞凋亡:细胞的死亡是个体存活的正常现象，常见的细胞死亡形式有3种：坏死、凋亡和细胞毒性。多细胞生物的生命活动中，因为环境因素的突然变化或病原物的入侵，导致一部分细胞死，称为细胞的病理死亡，或细胞坏死。坏死是细胞暴露于严重的物理或化学刺激时导致的细胞死亡；细胞毒性是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件，不依赖于其它两种细胞死亡机理，如杀伤T细胞的细胞毒性作用。

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