REH细胞 细胞株复苏失败原因分析

REH细胞 细胞株复苏失败原因分析

产品名称：REH细胞

中文名称：人急性非B非T淋巴细胞白血病

种属：人

2017年新学期，迎着朝阳，放飞梦想，久别重逢，相聚一堂，百尺竿头，更进一步，学无止境，自立自强，为国争光，慧颖细胞库为答谢各位莘莘学子的厚爱，在新学期开学之际，将慧颖细胞库1223株细胞特惠出售，更多活动详情，请致电市场部！

REH细胞 细胞株复苏失败原因分析

有的客户在COS-1细胞复苏传代后发现贴壁细胞状态不好，形态不佳，透光度亦不好，如果老师认为复苏过程没问题，那就核实下是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。

有的老师认为首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。

1、确认下冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，但我们因为这个问题就两种肺癌细胞和一种肝癌细胞专门做过试验，这个是绝大部分人细胞复不活的一个原因。太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。

2、老师的冻存液好不好，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。

3、老师的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过7%，大于5%，太多也不好。

4、老师在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。

5、老师的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。

6、如果老师的细胞污染，你是否能很快看到。从这个角度讲建议去除离心这步。

7、老师的细胞在冻存前是否过密。

还有，我们是不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。我们的细胞房不换拖鞋，非常脏，别人的细胞都污染，很多细胞都污染到绝种，但我们的只污染一次（两年内只有两瓶），那次是因为当初有某高校组织学生参观我们细胞库给动过了，我们每次细胞摆放顺序都是记住的。如果老师老怀疑孵箱污染，我们会认为老师的复苏培养细胞经验还需要进一步熟练和积累经验。

每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜。

REH细胞 细胞株复苏失败原因分析

MN60    人B细胞白血病细胞  人  B细胞白血病；男性   1640    悬浮       

COLO-1  人角质形成层细胞    人  角质形成层  DMEM    贴壁       

Hut-102 人皮肤T淋巴瘤细胞  人  皮肤；T淋巴瘤   1640    悬浮       

HPMC    人腹膜间皮细胞  人  腹膜间皮细胞    1640    贴壁       

SK-N-FI     人脑神经母细胞瘤细胞    人  神经母细胞瘤；男性  DMEM    贴壁       

OCI-LY1 人弥漫大B淋巴瘤细胞    人  弥漫大B淋巴瘤；男性    IMDM    悬浮       

hRPE    人视网膜色素上皮细胞    人  视网膜；色素上皮细胞    1640    贴壁       

SG231   人胆管上皮癌细胞    人  肝内胆管癌；男性    1640    贴壁   

CCLP1   人胆管癌细胞    人  肝内胆管癌；女性    DMEM    贴壁   

hESC    人子宫内膜间质细胞  人  子宫内膜；间质细胞；女性    EMEM    贴壁   

BAr-T   人食管上皮细胞  人  食管；HGNC-TERT转化；男性   DMEM    贴壁   

HIBEC   人肝内胆管上皮细胞 人  肝内胆管；上皮细胞 1640    贴壁   

KYSE180 人食管鳞癌细胞  人  食管鳞癌；男性  1640    贴壁   

melan-a 小鼠黑色素细胞  小鼠    黑色素细胞；自发永生；C57BL/6   1640    贴壁   

RBSMC   大鼠脑动脉平滑肌细胞    大鼠    脑动脉；平滑肌  DMEM    贴壁   

 H4IIEC3    大鼠肝癌细胞    大鼠    肝癌；雄性；AxC DMEM    贴壁   

LIPF155C    人胆管癌细胞    人  胆管癌  DMEM/1640   贴壁   

LIPF178C    人胆管癌细胞    人  胆管癌  DMEM/1640   贴壁   

SW1783  人脑星形胶质瘤细胞  人  间变性星形细胞瘤；男性  DMEM    贴壁   

LICCF   人肝内胆管癌细胞    人  肝内胆管癌  1640    贴壁   

QGY7703 人肝癌细胞  人  肝癌；女性  1640    贴壁   

HCCLM6  人肝癌细胞  人  肝癌    1640    贴壁   

ST2 小鼠骨髓基质细胞    小鼠    基质；BALB/c    DMDM    贴壁   

K7M2-WT 小鼠骨肉瘤成骨细胞  小鼠    骨肉瘤；肺转移；雌性；BALB/c    EMEM    贴壁   

WB-F344 大鼠肝上皮样干细胞  大鼠    肝；自发永生；Fischer 344   DMEM    贴壁   

Hs683   人脑胶质瘤细胞  人  少突神经胶质瘤；男性    DMEM    贴壁   

SV40-MES-13 小鼠肾小球系膜细胞  小鼠    肾小球系膜；SV40转化    DMEM    贴壁   

C8166   人T淋巴细胞白血病细胞  人  T淋巴细胞白血病；HTLV-1转化    1640    悬浮   

HSAEC1-KT   人肺小气道上皮细胞  人  肺；HGNC-TERT转化；男性 DMEM    贴壁   

L-540   人霍奇金淋巴瘤细胞  人  霍奇金淋巴瘤；女性  1640    悬浮   

rRMECs  大鼠视网膜微血管内皮细胞    大鼠    视网膜微血管；内皮细胞  DMEM    贴壁   

GC9811-P    人胃癌腹膜高转移细胞    人  胃癌    1640    贴壁   

HepG2.2.15  稳转HBV病毒HepG2细胞  人  肝癌；稳转HBV病毒  IMDM    贴壁   

BSC40   非洲绿猴肾细胞  非洲绿猴    肾；自发永生    DMEM    贴壁   

SNU-5   人胃癌细胞  人  胃癌；女性  1640    悬浮   

RASMCs  大鼠气道平滑肌细胞  大鼠    气道平滑肌  DMEM    贴壁   

OSK-1   小鼠诱导型多能干细胞(iPS细胞)   小鼠    诱导型多能干细胞    DMEM    贴壁   

B35 大鼠神经母细胞瘤细胞    大鼠    神经母细胞瘤；BDIX  DMEM    贴壁   

HCE-2 [50.B1]   人角膜上皮细胞  人  角膜上皮；Ad12-SV40；男性   1640    贴壁    为了应付季节变化CV-1细胞运输、培养带来的真菌等污染问题，公司特做以下建议：

1）细胞的运输、转移过程中，请勿打开自封袋；拿放细胞时请持瓶体，切勿在非无菌环球中碰触、拧动瓶口封口膜位置

2）进入生物安全柜前，打开自封袋拿出培养瓶，喷上酒精放进操作台（不建议使用酒精棉球擦拭），撕开封口膜后，用酒精灯外焰对瓶口烧灼一圈（3秒左右）

3）竖立培养瓶，拧开瓶盖（如是贴壁细胞，请用真空泵或吸管移除原配培养基，切勿让瓶口处的液体回流进瓶内）

4）更换为含10%-20%血清的*培养基，严格按照无菌操作要求继续培养

REH细胞 细胞株复苏失败原因分析