EBTr （NBL-4）细胞 细胞株复苏失败原因分析

EBTr (NBL-4)细胞 细胞株复苏失败原因分析

产品名称：EBTr (NBL-4)细胞

中文名称：牛胚气管细胞

种属：牛

来源：

培养条件：

生长状态：

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EBTr (NBL-4)细胞 细胞株复苏失败原因分析

有的客户在COS-1细胞复苏传代后发现贴壁细胞状态不好，形态不佳，透光度亦不好，如果老师认为复苏过程没问题，那就核实下是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。

有的老师认为首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。

1、确认下冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，但我们因为这个问题就两种肺癌细胞和一种肝癌细胞专门做过试验，这个是绝大部分人细胞复不活的一个原因。太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。

2、老师的冻存液好不好，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。

3、老师的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过7%，大于5%，太多也不好。

4、老师在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。

5、老师的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。

6、如果老师的细胞污染，你是否能很快看到。从这个角度讲建议去除离心这步。

7、老师的细胞在冻存前是否过密。

还有，我们是不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。我们的细胞房不换拖鞋，非常脏，别人的细胞都污染，很多细胞都污染到绝种，但我们的只污染一次（两年内只有两瓶），那次是因为当初有某高校组织学生参观我们细胞库给动过了，我们每次细胞摆放顺序都是记住的。如果老师老怀疑孵箱污染，我们会认为老师的复苏培养细胞经验还需要进一步熟练和积累经验。

每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜。

EBTr (NBL-4)细胞 细胞株复苏失败原因分析

CHL 仓鼠肺细胞 中国仓鼠 肺；自发永生；雌性 DMEM 贴壁

R 1610 仓鼠肺细胞 中国仓鼠

V79 仓鼠肺细胞 中国仓鼠 肺；自发永生；雄性 DMEM 贴壁

CHO/dhFr- 仓鼠卵巢细胞,二氢叶酸还原酶缺陷 中国仓鼠

CHO-K1 仓鼠卵巢细胞亚株 中国仓鼠 卵巢；自发永生；雌性 F12K 贴壁

CTLA4 Ig-24 中国仓鼠卵巢细胞 中国仓鼠

Lec1 仓鼠卵巢细胞 中国仓鼠

HMy2.CIR 人B淋巴母细胞 人 B细胞；EBV转染；女性 IMDM 悬浮

hFOB 1.19 人SV40转染成骨细胞 人 成骨细胞；SV40转化；条件永生；女性 DMEM/F12 贴壁

HBL-100 人整合SV40基因的乳腺上皮细胞 人 乳腺；上皮细胞；SV40转化；男性 1640 贴壁

EA.hy926 人脐静脉细胞融合细胞 人 脐静脉；内皮细胞；A549融合；女性 DMEM 贴壁

WISH 人羊膜细胞 人 宫颈癌；女性 EMEM 贴壁

RWPE-1 人正常前列腺上皮细胞 人 前列腺上皮；HPV18转化；男性 F12K/1640 贴壁

SV-HUC-1 人输尿管上皮永生化细胞 人 输尿管上皮；SV40转化；男性 F12K 贴壁

WPMY-1 人正常前列腺基质永生化细胞 人

Pt K1 (NBL-3) 袋鼠肾细胞 长鼻袋鼠

Ana-1 小鼠巨噬细胞 小鼠 巨噬细胞；J2逆转录病毒转染；C57BL/6 1640 悬浮

MC3T3-E1 Subclone 14 小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14 小鼠 前骨细胞；自发永生；C57BL/6 EMEM 贴壁

A9 小鼠皮下结缔组织细胞 小鼠

LWnt-3A 小鼠皮下结缔组织细胞 小鼠

3T3-L1 小鼠胚胎成纤维细胞 小鼠 胚胎；成纤维；自发永生；雄性；Swiss albino DMEM 贴壁

3T6-Swiss albino 小鼠胚胎成纤维细胞 小鼠 胚胎；成纤维；自发永生；雄性；Swiss albino DMEM 贴壁

BALB/3T3 clone A31 小鼠胚胎成纤维细胞 小鼠 胚胎；成纤维；自发永生；雄性；BALB/c DMEM 贴壁

C2C12 小鼠成肌细胞 小鼠 成肌细胞；自发永生，雌性；C3H DMEM 贴壁

NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L] 小鼠成纤维细胞 小鼠 成纤维细胞；自发永生；雄性；C3H/An

TM3 小鼠睾丸间质细胞 小鼠 睾丸间质；自发永生；雄性 1640 贴壁

B95-8 绒猴EBV转化的白细胞 绒猴 白细胞；EBV转化 1640 悬浮

Mv.1.Lu(NBL-7) 貂肺上皮细胞 貂 肺；自发永生 DMEM/EMEM 贴壁

MCF7 [MCF-7] 人乳腺癌细胞 人 浸润性导管癌；胸腔积液转移；女性 EMEM

MDA-MB-231 人乳腺癌细胞 人 乳腺腺癌；胸腔积液转移；女性 L15

MDA-MB-415 人乳腺腺癌细胞 人 乳腺腺癌；胸腔积液转移；女性 L15

MDA-MB-435S 人乳腺导管癌 人

C-33 A 人子宫颈癌 人

HeLa 人宫颈癌细胞 人 宫颈癌；女性 DMEM

HeLa 229 人宫颈癌细胞 人 宫颈癌；女性 EMEM

ME-180 人子宫颈表皮癌细胞 人 宫颈鳞状细胞癌；女性 EMEM

MS751 人子宫颈表皮癌细胞 人

SiHa 人子宫颈鳞癌细胞 人 宫颈鳞状细胞癌；女性 EMEM

JAR 人胎盘绒毛癌细胞 人

JEG-3 人绒毛膜癌细胞 人 妊娠性绒毛膜癌；脑转移；女性 EMEM

RD 人恶性胚胎横纹肌瘤细胞 人 胚胎性横纹肌肉瘤；女性 DMEM

A-375 人恶性黑色素瘤细胞 人 无黑色素黑色素瘤；女性 DMEM

为了应付季节变化CV-1细胞运输、培养带来的真菌等污染问题，公司特做以下建议：

1）细胞的运输、转移过程中，请勿打开自封袋；拿放细胞时请持瓶体，切勿在非无菌环球中碰触、拧动瓶口封口膜位置

2）进入生物安全柜前，打开自封袋拿出培养瓶，喷上酒精放进操作台（不建议使用酒精棉球擦拭），撕开封口膜后，用酒精灯外焰对瓶口烧灼一圈（3秒左右）

3）竖立培养瓶，拧开瓶盖（如是贴壁细胞，请用真空泵或吸管移除原配培养基，切勿让瓶口处的液体回流进瓶内）

4）更换为含10%-20%血清的*培养基，严格按照无菌操作要求继续培养