服务热线:
产品目录/ PRODUCT MENU
技术支持

您现在的位置:首页  >  技术文章  >  TU212细胞|TU212细胞株 培养

TU212细胞|TU212细胞株 培养

发布时间:2016-12-22浏览:1644次

TU212细胞|TU212细胞株 培养

TU212细胞|TU212细胞株 培养 中文名称:人喉癌细胞株

对于贴壁细胞,若细胞漂浮:培养瓶不开封,用75%酒精擦拭后平躺置于培养箱内。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,换成新鲜的培养基;如细胞还不贴壁,将细胞离心收集移到新的培养瓶中,原培养瓶加部分新鲜培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。对于悬浮细胞:收到细胞后,将细胞全部离心,去掉旧的培养基,换成新鲜的培养基继续培养。

特别注意:(如使用公共实验室或者初次接触,建议添加双抗培养)

(1)贴壁细胞收到当天有少量或没有飘忽的细胞可以当天换液,因为路途颠簸造成大量飘忽的情况时,请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代,请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养

(2)收到细胞后请尽快更换为含10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶,请在原瓶培养基中额外添加10%的血清,(原瓶培养基的继续使用时间zui长不宜超过72小时)

(3)如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并SUER技术人员

细胞接收后的操作流程与注意事项:

1)贴壁细胞生长缓慢;适当提高血清浓度(zui高不能超过20%),或可根据该细胞生长特性生长密度,考虑胰酶消化后,转移到新的培养瓶继续培养

2)如果细胞为贴壁细胞,而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天;同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡,请及时实验室技术人员会跟进解决

3)生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养

细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)

(1)吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间,通常控制在1-2min)

(2)注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存

(3)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的*培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养

(4)镜下观察消化情况,在HS505.T人淋巴结成纤维样细胞生长特性边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml*培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散。

请各位老师以随货说明为主

 

MTT点板时一定要将细胞消化成单个细胞,而且一定要混匀,用排枪,否则,MTT的SD会狂大!

2、点板布局

其实这一点很多人不懈一顾。如果你的细胞要养48 h或更长,建议不要吝啬96-孔板的四周边孔,这32个边孔不能使用,建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。因为细胞培养过程中,边孔的水分蒸发很快,培养液及里面的药物会出现浓缩现象,细胞的状况就复杂了,有些人称之为%26ldquo;边缘效应%26rdquo;这些孔的SD也会狂大,既然如此,不如不用。

3、加MTT

如果确认你考察的药物没有氧化还原性,你可以直接加入MTT溶液(总体积的1/10),如果你没有把握,建议在加MTT前换一次液;如果你肯定考察的药物的氧化还原性很强,比如谷胱甘肽、Vit E、VitC,那建议你用PBS将细胞洗洗,否则这些药物会将MTT还原成棕褐色沉淀,这种效果可能是你不需要的。

4、加入MTT后的反应

时间为3-4h,此时弃去各孔中的液体在加入200微升的DMSO。为了将沉淀溶解*,尽可能将水弃除干净,加入DMSO后在摇床上震摇10min。提醒:如果你的细胞贴壁不好,此时的沉淀在弃去液体时易丢失,因此贴壁不好的细胞在点板时记得将96孔板用多聚赖氨酸处理处理,要么在弃液体时先用甩板机离心,再轻轻弃去液体。关于DMSO的量,每孔的体积有点儿差异不干扰检测,只要能将沉淀*溶解就行了。至于DMSO的体积差异不同为什么不影响检测值已经被数学证明了,在此我不多说,如果有人不明白我再证明给他看。当然为了养成良好的实验习惯,DMSO的体积还是一致的好。

5、检测MTT

还原的MTT在460-630均有较好的吸收,如果你的酶标仪是滤光片,可以选470 nm左右或630 nm左右的滤光片,如果酶标仪有单波长,你可以在检测前扫描一下吸收谱,选用zui大细说波长检测就是了,zui大波长,大概在550nm附近,必要时加一个参比波长以扣除非特异性吸收。

6、吸收值分析

在理想的MTT实验中,如果是细胞抑制实验,不加药物处理组的吸收值应该在0.8-1.2左右,太小检测误差占的比例较多,太大吸收值可能已经超出线性范围。这个原理在朗伯-比尔定律中有解释。

7、建议

如果你觉得MTT中出现的问题不好解决,那么建议你做CCK-8实验,原理与MTT相似,但操作上简化些,当然,费用也稍微高一些。

慧颖生物TU212细胞|TU212细胞株 培养 囊括种类比较多,热卖产品主要有:Nthy-ori 3-1细胞,人正常甲状腺细胞株;ARO细胞,人低分化甲状腺细胞株;WRO细胞,人低分化甲状腺细胞株;TT细胞,人甲状腺导管癌细胞株; ARO细胞,人未分化甲状腺癌细胞株;TPC-1细胞,人甲状腺癌细胞株;FTC-133细胞,人甲状腺癌细胞株;SW579细胞,人甲状腺癌细胞等;TU212细胞,人喉癌细胞株;TU686细胞,人喉癌细胞株;K1细胞,人甲状腺细胞株;TAK细胞,人甲状腺细胞株等。

上海慧颖生物科技有限公司 版权所有    备案号:沪ICP备12016933号-2

技术支持:化工仪器网    管理登陆    网站地图

细胞株、Hs578Bst细胞、ND7/23细胞、bel-7407细胞、EA.hy926细胞、A2780细胞、人肝癌细胞株、RAW264.7细胞、NB4细胞、Sp2/0细胞、KYSE30细胞

联系电话:
15821734033

微信服务号