ARO细胞|ARO细胞株 培养

ARO细胞|ARO细胞株 培养

ARO细胞，人甲状腺癌细胞 这款细胞长的比较慢，对血清要求比较高，建议用GIBCO 10099-141澳洲源胎牛血清或者SERANA北美胎牛血清来培养。

对于贴壁细胞，若细胞漂浮：培养瓶不开封，用75%酒精擦拭后平躺置于培养箱内。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，换成新鲜的培养基；如细胞还不贴壁，将细胞离心收集移到新的培养瓶中，原培养瓶加部分新鲜培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。对于悬浮细胞：收到细胞后，将细胞全部离心，去掉旧的培养基，换成新鲜的培养基继续培养。

特别注意：（如使用公共实验室或者初次接触，建议添加双抗培养）

（1）贴壁细胞收到当天有少量或没有飘忽的细胞可以当天换液，因为路途颠簸造成大量飘忽的情况时，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养

（2）收到细胞后请尽快更换为含10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，（原瓶培养基的继续使用时间zui长不宜超过72小时）

（3）如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并SUER技术人员

细胞接收后的操作流程与注意事项：

1）贴壁细胞生长缓慢；适当提高血清浓度（zui高不能超过20%），或可根据该细胞生长特性生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养

2）如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时实验室技术人员会跟进解决

3）生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养

细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）

（1）吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在1-2min）

（2）注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存

（3）取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的*培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养

（4）镜下观察消化情况，在HS505.T人淋巴结成纤维样细胞生长特性边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml*培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。

请各位老师以随货说明为主

MTT点板时一定要将细胞消化成单个细胞，而且一定要混匀，用排枪，否则，MTT的SD会狂大！

2、点板布局

其实这一点很多人不懈一顾。如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了，有些人称之为%26ldquo;边缘效应%26rdquo;这些孔的SD也会狂大，既然如此，不如不用。

3、加MTT

如果确认你考察的药物没有氧化还原性，你可以直接加入MTT溶液（总体积的1/10），如果你没有把握，建议在加MTT前换一次液；如果你肯定考察的药物的氧化还原性很强，比如谷胱甘肽、Vit E、VitC，那建议你用PBS将细胞洗洗，否则这些药物会将MTT还原成棕褐色沉淀，这种效果可能是你不需要的。

4、加入MTT后的反应

时间为3-4h，此时弃去各孔中的液体在加入200微升的DMSO。为了将沉淀溶解*，尽可能将水弃除干净，加入DMSO后在摇床上震摇10min。提醒：如果你的细胞贴壁不好，此时的沉淀在弃去液体时易丢失，因此贴壁不好的细胞在点板时记得将96孔板用多聚赖氨酸处理处理，要么在弃液体时先用甩板机离心，再轻轻弃去液体。关于DMSO的量，每孔的体积有点儿差异不干扰检测，只要能将沉淀*溶解就行了。至于DMSO的体积差异不同为什么不影响检测值已经被数学证明了，在此我不多说，如果有人不明白我再证明给他看。当然为了养成良好的实验习惯，DMSO的体积还是一致的好。

5、检测MTT

还原的MTT在460-630均有较好的吸收，如果你的酶标仪是滤光片，可以选470 nm左右或630 nm左右的滤光片，如果酶标仪有单波长，你可以在检测前扫描一下吸收谱，选用zui大细说波长检测就是了，zui大波长，大概在550nm附近，必要时加一个参比波长以扣除非特异性吸收。

6、吸收值分析

在理想的MTT实验中，如果是细胞抑制实验，不加药物处理组的吸收值应该在0.8-1.2左右，太小检测误差占的比例较多，太大吸收值可能已经超出线性范围。这个原理在朗伯-比尔定律中有解释。

7、建议

如果你觉得MTT中出现的问题不好解决，那么建议你做CCK-8实验，原理与MTT相似，但操作上简化些，当然，费用也稍微高一些。

慧颖生物ARO细胞|ARO细胞株 培养 囊括种类比较多，热卖产品主要有：Nthy-ori 3-1细胞，人正常甲状腺细胞株；ARO细胞，人低分化甲状腺细胞株；WRO细胞，人低分化甲状腺细胞株；TT细胞，人甲状腺导管癌细胞株； ARO细胞,人未分化甲状腺癌细胞株；TPC-1细胞，人甲状腺癌细胞株；FTC-133细胞，人甲状腺癌细胞株；SW579细胞，人甲状腺癌细胞等。