人类免疫缺陷病毒1型p24抗原 试剂盒

人类免疫缺陷病毒1型p24抗原

酶联免疫试剂盒

【产品名称】

通用名：人类免疫缺陷病毒1型p24抗原酶联免疫试剂盒

英文名：ENZYME IMMUNOASSAY FOR DETECTION OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS TYPE I P24 ANTIGEN IN HUMAN SERUM, PLASMA AND CELL CULTURE SUPERNATANT

【包装规格】

96人份/盒。

【预期用途】

本试剂盒用于人类免疫缺陷病毒1型p24抗原（Human Immunodeficiency Virus Type 1 p24 Antigen）的定量检测，适用于人血清（或血浆）及细胞培养上清液等标本，仅供研究使用。

【检验原理】

本产品采用固相酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）检测人血清（或血浆）中的游离HIV-1 p24抗原和细胞培养上清液等标本中的HIV-1 p24抗原。本分析方法是基于双抗体夹心的非竞争性免疫分析。校准品和样品中HIV-1 p24抗原与固相抗- p24单克隆抗体和生物素标记的抗-p24多克隆抗体通过免疫反应，形成固相抗-p24单克隆抗体—p24抗原—抗-p24多克隆抗体-生物素复合物；温育后洗涤，洗去非特异或多余的抗原和多余的生物素标记的抗- p24多克隆抗体；然后加入HRP（Horseradish Peroxidase，辣根过氧化物酶）标记的链亲和素，形成固相抗- p24单克隆抗体—p24抗原—抗-p24多克隆抗体-生物素—链亲和素-HRP复合物；温育后洗涤，洗去多余的HRP标记的链亲和素。加入TMB-H₂O₂底物溶液，HRP催化H₂O₂氧化TMB生成蓝色的产物（zui大吸收峰655nm），加入终止液终止酶催化反应，生成黄色产物（zui大吸收峰450nm）。其吸光度与校准品和样品中的HIV-1 p24抗原浓度成正相关。通过剂量－反应曲线可得出样品中HIV-1 p24抗原浓度。

【主要组成成份】

【储存条件及有效期】

试剂盒置2~8℃保存，有效期为12个月。

【适用仪器】

酶标仪、洗板机、恒温培养箱等。

【样本要求】

1. 样本：人血清（或血浆）样本，和细胞培养上清液等标本。
2. 存放：样本于2~8℃可储存2天；样本长期储存应放置于-20℃或-20℃以下环境中，且不宜反复冻融5次以上。

【检验方法】

1. 试剂配制方法

• HIV-1 p24校准品系列的配制：

取6支离心管，编号A、B、C、D、E和F。管F中取900µL校准品稀释液，加入100µL HIV-1 p24校准品（200IU/mL，4,000pg/mL），混匀，作1:10稀释，配制成校准品F（20IU/mL，400pg/mL）；管E中取500µL校准品稀释液，加入500µL校准品F，混匀，作1:2稀释，配制成校准品E（10IU/mL，200pg/mL） ；管D中取500µL校准品稀释液，加入500µL校准品E，混匀，作1:2稀释，配制成校准品D（5IU/mL，100pg/mL）；管C中取500µL校准品稀释液，加入500µL校准品D，混匀，作1:2稀释，配制成校准品C（2.5IU/mL，50pg/mL）；管B中取500µL校准品稀释液，加入500µL校准品C，混匀，作1:2稀释，配制成校准品B（1.25IU/mL，25pg/mL）；以校准品稀释液作为校准品A。共配制成6个浓度的HIV-1 p24校准品系列（A-F）：A  0、B  1.25IU/mL（25pg/mL）、C  2.5IU/mL（50pg/mL）、D  5IU/mL（100pg/mL）、E  10IU/mL（200pg/mL）和 F  20IU/mL（400pg/mL）。配制好的HIV-1 p24校准品系列应保存在2~8°C，于一月内使用。

• 工作浓度洗涤液的配制：

用纯水（蒸馏水或去离子水）将浓缩洗涤液稀释20倍，即为工作浓度洗涤液。工作浓度洗涤液应保存在2~8℃，于一月内使用。

1. 标准操作方法

• 从铝箔袋中取出所需数量的微孔板条，装至微孔板架上。设空白对照1孔，HIV-1 p24校准品A、B、C、D、E和F各2孔，其余各孔为待测样品，建议每个待测样品均设置2孔；编号标记。向各孔内分别加入25μL的生物素标记抗体（空白对照孔不加），然后再向各孔内分别加入75μL的HIV-1 p24校准品或待测样品，轻轻振荡微孔板，使内容物充分混匀。
• 用封板膜将微孔板密封，置37℃温育60分钟。
• 弃去微孔板反应孔内液体，每孔（含空白对照孔）加入350μL工作浓度洗涤液，然后将洗涤液弃去。重复洗板共5次，zui后拍干。
• 每孔加 HRP标记链亲和素100μL（空白对照孔不加），用封板膜将微孔板密封，置37℃温育30分钟。
• 弃去微孔板反应孔内液体，每孔（含空白对照孔）加入350μL工作浓度洗涤液，然后将洗涤液弃去。重复洗板共5次，zui后拍干。
• 每孔加底物缓冲液和显色剂各50μL（含空白对照孔），用封板膜将微孔板密封，置室温（18~30℃）避光温育30分钟。
• 每孔加终止液50μL（含空白对照孔），轻轻振荡微孔板，使内容物充分混匀。
• 终止反应后1小时内，用酶标仪在450nm波长处，测定各孔吸光度值，参考波长选择620-700nm。

1. 数据处理

• 求出HIV-1 p24抗原校准品的吸光度平均值。
• 以HIV-1 p24抗原校准品的吸光度平均值为纵轴，以HIV-1 p24校准品的浓度为横轴，在双对数坐标图上作出标准曲线。
• 如果待测样品试验了2孔，求出待测样品的吸光度平均值。
• 将测得的样品的吸光度值（或吸光度平均值）在上述标准曲线上求出样品中的HIV-1 p24抗原的浓度。也可以通过软件用zui小二乘法拟合曲线，求出样品中的HIV-1 p24抗原的浓度。

【检验结果的解释】

1. 质量控制：空白对照校准品吸光度值不高于0.050，A点（0pg/mL）吸光度值不高于0.100，F点（400pg/mL）吸光度值不低于1.000。
2. 对于吸光度值超出校准品F点的样品，可用校准品稀释液稀释适宜倍数后再行测定，样本中HIV-1 p24抗原浓度值为稀释后测定值×稀释倍数。

【检验方法的局限性】

1. 本品仅适用于研究用途，不用于临床诊断。
2. 本品仅适用于游离的HIV-1 p24抗原含量的检测，不能用于总抗原含量的检测。
3. 样本pH应保证在5-10之间，过低或过高的pH可能会造成HIV-1 p24抗原的测量值异常。

【产品性能指标】

1. 测定范围：0~400pg/mL。
2. 分析灵敏度：zui低检测限不高于5pg/mL。
3. 校准品剂量-反应曲线的线性：线性相关系数R>0.9900。典型校准曲线如下图
4. 精密性：批内变异系数（Within-Run CV）不高于10%，批间变异系数（Between-Run CV）不高于15%。
5. 特异性：与HIV-1和HIV-2的env蛋白、pol蛋白和gag蛋白中的p17（1型）等无交叉反应。
6. 胆红素（Bilirubin，20mg/dL）、血红蛋白（Hemoglobin，500mg/dL）和血脂（Triolein， 3,000mg/dL）对HIV-1 p24抗原的测量值无明显干扰。
7. 抗凝剂（肝素0.2mg/mL、柠檬酸钠100mg/mL和EDTA 20mg/mL）对HIV-1 p24抗原的测量值无明显干扰。

【注意事项】

1. 本品仅适用于研究用途。
2. 试剂盒从冷藏环境中取出，应平衡至室温（18~30℃）后再使用。未用完的微孔条用自封袋密封保存。
3. 储存和温育时应避光进行。
4. 不得直接用手接触终止液。若不慎接触则应立即用大量自来水冲洗。
5. 操作应迅速，加样品时间过长、洗涤后放置太久均可能影响检测结果的准确性。
6. 每次测定均应做标准曲线。
7. 操作应按说明书严格进行。严格控制反应温度和时间，并尽量使用移液器加样，结果判定以酶标仪读数为准。
8. 不同批号试剂请勿混用，不要使用过期试剂。
9. 本品含有部分动物源性物质，操作必须符合国家有关传染性疾病检测的实验室管理及安全的规定，并按有关实验室规程处理所使用组份及样品。

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【生产企业】

企业名称：上海慧颖生物科技有限公司

地    址：上海市嘉定区鹤旋路

邮政编码：201800

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