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人类免疫缺陷病毒1型p24抗原检测ELISA试剂盒

  • 产品型号:
  • 产品时间:2017-11-22
  • 简要描述:人类免疫缺陷病毒1型p24抗原检测ELISA试剂盒,2-8度保存!只可用于科研实验,不得用于其他!!
  • 产品简介

人类免疫缺陷病毒1p24抗原ELISA试剂盒

【产品名称】

通用名:人类免疫缺陷病毒1p24抗原酶联免疫试剂盒

英文名:ENZYME IMMUNOASSAY FOR DETECTION OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS TYPE I P24 ANTIGEN IN HUMAN SERUM, PLASMA AND CELL CULTURE SUPERNATANT

【包装规格】

96人份/盒。

【预期用途】

本试剂盒用于人类免疫缺陷病毒1p24抗原(Human Immunodeficiency Virus Type 1 p24 Antigen)的定量检测,适用于人血清(或血浆)及细胞培养上清液等标本,仅供研究使用。

人类免疫缺陷病毒1p24抗原ELISA试剂盒

【检验原理】

本产品采用固相酶联免疫吸附分析法Enzyme-linked Immunosorbent AssayELISA检测人血清(或血浆)中的游离HIV-1 p24抗原和细胞培养上清液等标本中的HIV-1 p24抗原。本分析方法是基于双抗体夹心的非竞争性免疫分析。校准品和样品中HIV-1 p24抗原与固相抗- p24单克隆抗体和生物素标记的抗-p24多克隆抗体通过免疫反应,形成固相抗-p24单克隆抗体p24抗原—抗-p24多克隆抗体-生物素复合物;温育后洗涤,洗去非特异或多余的抗原和多余的生物素标记的抗- p24多克隆抗体;然后加入HRPHorseradish Peroxidase,辣根过氧化物酶)标记的链亲和素,形成固相抗- p24单克隆抗体p24抗原-p24多克隆抗体-生物素—链亲和素-HRP复合物;温育后洗涤,洗去多余的HRP标记的链亲和素。加入TMB-H2O2底物溶液,HRP催化H2O2氧化TMB生成蓝色的产物(zui大吸收峰655nm),加入终止液终止酶催化反应,生成黄色产物(zui大吸收峰450nm)。其吸光度与校准品和样品中的HIV-1 p24抗原浓度成正相关。通过剂量-反应曲线可得出样品中HIV-1 p24抗原浓度。

 

试验类型

温育时间

试验所需时间

试验温度

试验所需样本体积

免疫度量分析

120 分钟

大约150分钟

37°C 和室温(18~30℃

75μL

人类免疫缺陷病毒1p24抗原ELISA试剂盒

【主要组成成份】

  1. 抗体包被板    

Antibody Coated Microplate

1

包被有鼠抗-HIV-1 p24单克隆抗体的聚苯乙烯微孔板,约200ng/孔。8×12条。

铝箔袋密封包装,含干燥剂。标签编号为R1

  1. HIV-1 p24抗原校准品

HIV-1 p24 Antigen Calibrator

1mL×1

重组HIV-1 p24抗原溶液,200IU/mL(约相当于4,000pg/mL),稀释液为校准品稀释液。用英国国家生物标准与检定所(National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC)提供的WHO标准品(HIV-1 p24 Antigen 90/636)校准。

绿色PP盖子和无色PP塑料管。标签编号为R2

  1. 校准品稀释液

Calibrator Diluent

20mL×1

磷酸盐缓冲液,含动物血清和钙化的正常人血浆(经ELISA检测,HBsAg、抗-HCV和抗-HIV 1+2均为阴性),pH7.3。防腐剂为NaN3(不超过0.1%)和EDTA

绿色PP盖子和无色HPDE塑料瓶。标签编号为R3

  1. 生物素标记抗体

Biotinylated Antibody

5mL×1

生物素标记的兔抗-HIV-1 p24多克隆抗体,约4µg/mL。缓冲液为Tris-HCl,含动物血清、稳定剂、表面活性剂和绿色染料,pH7.4。防腐剂为NaN3(不超过0.1%)。

蓝色PP盖子和无色HPDE塑料瓶。标签编号为R4

  1. HRP标记链亲和素

HRP Conjugated Streptavidin

20mL×1

HRP标记链亲和素,约0.1µg/mL25mU/mL HRP。缓冲液为Tris-HCl,含动物血清、稳定剂、表面活性剂和红色染料,pH7.4。防腐剂为ProClin®300(不超过1%)。

红色PP盖子和棕色HPDE塑料瓶。标签编号为R5

  1. 浓缩洗涤液

Concentrated Wash Buffer

50mL×1

含表面活性剂的磷酸盐缓冲液,20倍浓缩。防腐剂为ProClin®300(不超过1%)。

无色PP盖子和无色HPDE塑料瓶。标签编号为R6

 

  1. 底物缓冲液

Substrate Buffer

10mL×1

H2O2的乙酸盐缓冲液,pH5.0

无色PP盖子和无色HPDE塑料瓶。标签编号为R7

  1. 显色剂

Chromogen Solution

10mL×1

TMB的乙酸溶液,pH3.0

白色PP盖子和棕色HPDE塑料瓶。标签编号为R8

  1. 终止液

Stop Solution

10mL×1

2mol/L H2SO4溶液。

黄色PP盖子和无色HPDE塑料瓶。标签编号为R9

  1. 封板膜

Plate Sealer

6

用于温育时微孔板的密封。

  1. 说明书

Instruction for Use

1

本产品使用说明。

【储存条件及有效期】

试剂盒置2~8℃保存,有效期为12个月。

【适用仪器】

酶标仪、洗板机、恒温培养箱等。

【样本要求】

  1. 样本:人血清(或血浆)样本,和细胞培养上清液等标本。
  2. 存放:样本于2~8℃可储存2天;样本长期储存应放置于-20-20℃以下环境中,且不宜反复冻融5次以上。

【检验方法】

  1. 试剂配制方法
  • HIV-1 p24校准品系列的配制:

6支离心管,编号ABCDEF。管F中取900µL校准品稀释液,加入100µL HIV-1 p24校准品(200IU/mL4,000pg/mL),混匀,作1:10稀释,配制成校准品F20IU/mL400pg/mL);管E中取500µL校准品稀释液,加入500µL校准品F,混匀,作1:2稀释,配制成校准品E10IU/mL200pg/mL ;管D中取500µL校准品稀释液,加入500µL校准品E,混匀,作1:2稀释,配制成校准品D5IU/mL100pg/mL);管C中取500µL校准品稀释液,加入500µL校准品D,混匀,作1:2稀释,配制成校准品C2.5IU/mL50pg/mL);管B中取500µL校准品稀释液,加入500µL校准品C,混匀,作1:2稀释,配制成校准品B1.25IU/mL25pg/mL);以校准品稀释液作为校准品A。共配制成6个浓度的HIV-1 p24校准品系列(A-F):A  0B  1.25IU/mL25pg/mL)、C  2.5IU/mL50pg/mL)、D  5IU/mL100pg/mL)、E  10IU/mL200pg/mL)和 F  20IU/mL400pg/mL)。配制好的HIV-1 p24校准品系列应保存在2~8°C,于一月内使用。

校准品浓度

离心管编号

校准品稀释液

加入

20IU/mL400pg/mL

F

900µL

100µL  R2

10IU/mL200pg/mL

E

500µL

500µL F

5IU/mL100pg/mL

D

500µL

500µL E

2.5IU/mL50pg/mL

C

500µL

500µL D

1.25IU/mL25pg/mL

B

500µL

500µL C

  • 工作浓度洗涤液的配制:

用纯水(蒸馏水或去离子水)将浓缩洗涤液稀释20倍,即为工作浓度洗涤液。工作浓度洗涤液应保存在2~8,于一月内使用。

  1. 标准操作方法
  • 从铝箔袋中取出所需数量的微孔板条,装至微孔板架上。设空白对照1孔,HIV-1 p24校准品ABCDEF2孔,其余各孔为待测样品,建议每个待测样品均设置2孔;编号标记。向各孔内分别加入25μL的生物素标记抗体(空白对照孔不加),然后再向各孔内分别加入75μLHIV-1 p24校准品或待测样品,轻轻振荡微孔板,使内容物充分混匀。
  • 用封板膜将微孔板密封,置37温育60分钟。
  • 弃去微孔板反应孔内液体,每孔(含空白对照孔)加入350μL工作浓度洗涤液,然后将洗涤液弃去。重复洗板共5次,zui后拍干。
  • 每孔加 HRP标记链亲和素100μL(空白对照孔不加),用封板膜将微孔板密封,置37温育30分钟。
  • 弃去微孔板反应孔内液体,每孔(含空白对照孔)加入350μL工作浓度洗涤液,然后将洗涤液弃去。重复洗板共5次,zui后拍干。
  • 每孔加底物缓冲液和显色剂各50μL(含空白对照孔),用封板膜将微孔板密封,置室温(18~30)避光温育30分钟。
  • 每孔加终止液50μL(含空白对照孔),轻轻振荡微孔板,使内容物充分混匀。
  • 终止反应后1小时内,用酶标仪在450nm波长处,测定各孔吸光度值,参考波长选择620-700nm
  1. 数据处理
  • 求出HIV-1 p24抗原校准品的吸光度平均值。
  • HIV-1 p24抗原校准品的吸光度平均值为纵轴,以HIV-1 p24校准品的浓度为横轴,在双对数坐标图上作出标准曲线。
  • 如果待测样品试验了2孔,求出待测样品的吸光度平均值。
  • 将测得的样品的吸光度值(或吸光度平均值)在上述标准曲线上求出样品中的HIV-1 p24抗原的浓度。也可以通过软件用zui小二乘法拟合曲线,求出样品中的HIV-1 p24抗原的浓度。

【检验结果的解释】

  1. 质量控制:空白对照校准品吸光度值不高于0.050A点(0pg/mL)吸光度值不高于0.100F点(400pg/mL)吸光度值不低于1.000
  2. 对于吸光度值超出校准品F点的样品,可用校准品稀释液稀释适宜倍数后再行测定,样本中HIV-1 p24抗原浓度值为稀释后测定值×稀释倍数。

【检验方法的局限性】

  1. 本品仅适用于研究用途,不用于临床诊断。
  2. 本品仅适用于游离的HIV-1 p24抗原含量的检测,不能用于总抗原含量的检测。
  3. 样本pH应保证在5-10之间,过低或过高的pH可能会造成HIV-1 p24抗原的测量值异常。

【产品性能指标】

  1. 测定范围:0~400pg/mL
  2. 分析灵敏度:zui低检测限不高于5pg/mL
  3. 校准品剂量-反应曲线的线性:线性相关系数R>0.9900。典型校准曲线如下图

 

  1. 精密性:批内变异系数(Within-Run CV)不高于10%,批间变异系数(Between-Run CV)不高于15%
  2. 特异性:与HIV-1HIV-2env蛋白、pol蛋白和gag蛋白中的p171型)等无交叉反应。
  3. 胆红素(Bilirubin20mg/dL)、血红蛋白(Hemoglobin500mg/dL)和血脂(Triolein 3,000mg/dL)对HIV-1 p24抗原的测量值无明显干扰。
  4. 抗凝剂(肝素0.2mg/mL、柠檬酸钠100mg/mLEDTA 20mg/mL)对HIV-1 p24抗原的测量值无明显干扰。

【注意事项】

  1. 本品仅适用于研究用途。
  2. 试剂盒从冷藏环境中取出,应平衡至室温(18~30)后再使用。未用完的微孔条用自封袋密封保存。
  3. 储存和温育时应避光进行。
  4. 不得直接用手接触终止液。若不慎接触则应立即用大量自来水冲洗。
  5. 操作应迅速,加样品时间过长、洗涤后放置太久均可能影响检测结果的准确性。
  6. 每次测定均应做标准曲线。
  7. 操作应按说明书严格进行。严格控制反应温度和时间,并尽量使用移液器加样,结果判定以酶标仪读数为准。
  8. 不同批号试剂请勿混用,不要使用过期试剂。
  9. 本品含有部分动物源性物质,操作必须符合国家有关传染性疾病检测的实验室管理及安全的规定,并按有关实验室规程处理所使用组份及样品。

 

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