人（Rock-1）ELISA试剂盒 人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1试剂盒

人（Rock-1）ELISA试剂盒 人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1试剂盒

产品名称：人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）ELISA试剂盒

英文名称：Human Rho-associated protein kinase 1（ROCK1） ELISA kit

规格：48T/96T

适合种类：Human

预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等其它相关液体中Rock-1的含量

保存温度：4°C保存

有效期：6个月

反应时间：1-5个小时

所需样本量：50-100ul

检测波长：450 nm

检测范围：0.5 ng/ml -30 ng/ml

人（Rock-1）ELISA试剂盒 人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1试剂盒

本试剂仅供研究使用

目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）水平。用纯化的人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1），再与HRP标记的Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）浓度。

试剂盒组成：

试剂盒组成  48孔配置 96孔配置 保存

说明书 1份 1份

封板膜 2片（48）     2片（96）    

密封袋 1个 1个

酶标包被板  1×48    1×96    2-8℃保存

标准品：45ng/ml  0.5ml×1瓶    0.5ml×1瓶    2-8℃保存

标准品稀释液     1.5ml×1瓶    1.5ml×1瓶    2-8℃保存

酶标试剂    3 ml×1瓶     6 ml×1瓶     2-8℃保存

样品稀释液  3 ml×1瓶     6 ml×1瓶     2-8℃保存

显色剂A液  3 ml×1瓶     6 ml×1瓶     2-8℃保存

显色剂B液  3 ml×1瓶     6 ml×1瓶     2-8℃保存

终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

浓缩洗涤液  （20ml×20倍）×1瓶   （20ml×30倍）×1瓶   2-8℃保存

操作步骤：

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为30 ng/ml，20 ng/ml ，10 ng/ml，5 ng/ml， 2.5ng/ml）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项：

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。