人I型胶原蛋白（ColⅠ）ELISA试剂盒|Kit说明书

人I型胶原蛋白（ColⅠ）ELISA试剂盒|Kit说明书

产品名称：人I型胶原蛋白（ColⅠ）ELISA试剂盒

别名：人I型胶原蛋白（ColⅠ）ELISA检测试剂盒；人I型胶原蛋白（ColⅠ）ELISA酶免试剂盒

英文名称：Human Collagen TypeⅠ （ColⅠ） ELISA Kit；Human ColⅠELISA Kit

规格：96T

保存温度：2-8°C，避光保存

有效期：至少6个月

价格：1550元

运输方式：白色泡沫盒+充足冰袋+外包纸箱+诚信快递

售后：售后至文献发表成功

样本：血清、血浆、细胞上清液、组织上清液、组织匀浆、胸腹水、脑脊液、尿液等相关体液，订购时需向销售人员说明检测样本，不同样本，不同试剂盒。

试剂盒组成成分：

微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无

标准品0.3mL*6 管0.3mL*6 管无

样本稀释液6mL 3mL 无

检测抗体-HRP 10mL 5mL 无

20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释

底物A 6mL 3mL 无

底物B 6mL 3mL 无

终止液6mL 3mL 无

封板膜2 张2 张无

说明书1 份1 份无

自封袋1 个1 个无

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、2.5、5、10、20、40 ng/mL

人I型胶原蛋白（ColⅠ）ELISA试剂盒|Kit说明书

检测原理：

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被I型胶原蛋白（ColⅠ）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的I型胶原蛋白（ColⅠ）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

操作步骤：

1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5 次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL，15min 内，在450nm 波长处测定各孔的OD 值。

结果判断：

绘制标准曲线：在Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能：

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R 值，大于等于0.9900。

2. 灵敏度：zui低检测浓度小于1.0 ng/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

操作注意事项：

1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3. 浓度为0 的S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5 倍，zui终结果乘以5 才是样本实际浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

洗板方法：

1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5 次。

2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。