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人CD152,人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA试剂盒
目的:本试剂盒用于测定人血清,细胞上清及相关液体样本中细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)含量。
原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)水平。用纯化的人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4),再与HRP标记的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)浓度。
组成成分:封板膜+密封袋+酶标包被板+标准品+标准品稀释液+酶标试剂+样品稀释液+显色剂A液+显色剂B液+终止液+浓缩洗涤液。
范围:0.5 ng/mL -11ng/mL
保存温度:2-8℃
有效期:6个月
性能:样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上;批内与批间应分别小于9%和15%
实验前准备:
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
所需设备耗材:酶标仪(通用)+洗板机(可无)+移液器+烧杯
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