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小鼠I型胶原C端肽(CTX-I)Elisa试剂盒
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠CTX-I抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的CTX-I会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠CTX-I抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠CTX-I抗体与结合在包被抗体上的小鼠CTX-I结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色,加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值,CTX-I浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线求出标本中CTX-I的浓度。
标本收集:
1. 血清:全血标本于室温放置2小时或4℃置夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2. 血浆:抗凝剂推荐使用EDTA.Na2,标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,高血脂标本。
3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟,取上清检测。
4. 细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5. 其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测
6. 标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。
7. 标本收集后若不及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃/-80℃冰箱内,避免反复冻融,1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。
8. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品zui高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释(建议先做预实验,以确定稀释倍数)。
小鼠I型胶原C端肽(CTX-I)Elisa试剂盒
注意事项:
小鼠I型胶原C端肽(CTX-I)Elisa试剂盒
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