大鼠同型半胱氨（HCY）ELISA试剂盒

大鼠同型半胱氨（HCY）ELISA试剂盒检测原理：

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 HCY 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 HCY与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠HCY，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，zui后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，HCY浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中HCY浓度。

大鼠同型半胱氨（HCY）ELISA试剂盒操作流程：

1. 标准品的稀释与加样：标准品按照说明书稀释好五个梯度，各个梯度每孔加样量都为50μl，
2. 加样：分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液洗涤：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用；小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
6. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
7. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
8. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
9. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应
10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

11.计算:

以标准物的浓度为综坐标，OD值为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项：

 1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

 2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。

 3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。

 4. 本试剂盒宜置4^oC冰箱保存。

 5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！