核因子KB试剂盒，ELISA试剂盒说明书，小鼠NF-Kb试剂盒

产品名称：核因子KB试剂盒，ELISA试剂盒说明书，小鼠NF-Kb试剂盒

规格：48T/96T

品牌：Deco

报价：2800元

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相关 核因子KB试剂盒，ELISA试剂盒说明书，小鼠NF-Kb试剂盒 详细说明：

产品编号： HY01696

使用前*阅读说明书。本酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理，能测量小鼠NFκB，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

工作原理

核因子κB（NF-Kb），是一种蛋白质分子，其结构为一种体內的生物诱导分子（biological trigger），是在体內許多疾病的生理作用上扮演了重要的角色，从癌症到骨质疏松症，再到细菌感染，皆与之脫离不了关系，NF-kB发现与哺乳动物的细胞，平时结合与另一分子--IkB，IkB使得NF-kB分子失去生物活性，当一组启动信号启动NF-kB后，IkB脱离NF-kB，NF-kB恢復活性，进入细胞核。NF-kB位于TLR下游信号通路的枢纽位置，当细胞受到生物应激刺激后激活NF-kB，活化的NF-kB进入细胞核调节炎性细胞因子的表达，启动针对病原微生物的固有免疫和获得性免疫。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

每套试剂盒中内容（96T）

需要而未提供的试剂和器材

1． 37℃恒温箱。

2． 标准规格酶标仪。

3． 自动洗板机。

4． 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。

5． 蒸馏水，容量瓶等

6． 干净的试管和Eppendof管。

注意事项

1． 从-20℃取出的试剂盒，在4℃解冻过夜。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀，避免解冻时出现的分层，否则会出现浓度不均一的现象。

2． 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。

3． 配制各种试剂时，切记混匀！

4． 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

5． 建议所有标准品、样本都做双份检测。

6． 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！

7． 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样品的准备和保存

样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。

血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

样品稀释的一般原则

用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的*检测范围。样品的稀释应有详细记录。

试剂的准备和保存

A. 标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液，*溶解后做倍比稀释。

稀释后的标准品在2小时内使用。

B．生物素标记抗体工作液：在使用前2小时内准备。

1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实际配制时应多配制0.1-0.2ml）。

2． 按10ul生物素标记抗体加抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

C．亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的准备：在使用前1小时内准备。

1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实配时应多配制0.1-0.2ml）。

2． 按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

D.  TMB显色工作液的准备：在使用之前30分钟，按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。

操作程序

1． 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。

2． 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。

3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。

4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。

5． 将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。

6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。

7． 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。

8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。

9． 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应zui长不要超过30分钟）。

10． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。

11． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。

操作程序请致电咨询： ！

检测范围：1000pg/ml→15.6pg/ml。

敏感性：  ＜3pg/ml

特异性：  系统和其它因子无交叉反应。

保存：    -20℃ [短期内（如两周）可4℃]

有效期：  12个月（-20℃）。

用途：    用于体外定量分析液体标本（通用型）。