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慧颖生物提供优质血清,为实验助力!
Gemini100-512人AB血清
把细胞养好的三个关键要素是:良好的细胞来源,正确的实验操作,以及合适的培养体系。其中“合适的培养体系”就是要创造适合细胞生长的环境,给细胞建立一个满意的“家”,而胎牛血清就好比于这个家的装修,可以提高细胞的居住环境和舒适性,让细胞更好更快地生长
当然,胎牛血清并不是完美的,它除了可为细胞提供生长所必须的蛋白、细胞因子、激素和微量元素等多种营养物质,同时也含有内毒素、补体、抗体等对细胞生长有危害的成分,若选择不当,不合适的FBS会严重影响细胞的生长状态甚至导致细胞死亡。因此,FBS既是让细胞快乐成长的*营养物,又是可能导致细胞死亡的“定时の炸的啊弹”!辛苦养起来的细胞可能因为FBS用错而一切归零……
近年来无血清培养基和非动物来源的培养基越来越受到关注,但目前大部分细胞还无法适用这些培养基,并且存在费用较高和细胞生长较缓慢的缺点,因此,含有FBS的*培养基仍然是目前主流的细胞培养体系。
那么,应如何为你的细胞选购FBS呢?选购FBS应考虑哪些标准?
1.产品检测
每款FBS在生产上市之前,必须经过严格的质控检测。
质控环节*,以确保上市的血清符合规定合乎规格,而血清产品分析证书(COA)就是FBS质控的重要体现。在COA中,常规的检测指标包括内毒素、总蛋白、细菌、病毒等,例如我国药典规定,FBS中内毒素含量应≤10EU/mL,另外总蛋白为30-50mg/mL、血红蛋白检测不高于30mg/dL。
2. 可追溯性
目前市面上存在较多以假乱真的FBS产品,科研工作者对血清的真实产地、来源难以鉴别。
血清行业协会(ISIA)实施了供应链可追溯性的行业标准,以确保FBS的质量和安全性。
例如,FBS供应商是否保留原产地的可追溯记录?是否持有血清生产各阶段处理、运输和商业交易的文件?这些都是判断FBS可追溯性需要考虑的因素。
3. 生长验证
我们使用FBS目的是为了让细胞更真实、健康地生长。在确保了FBS的来源真实性、安全可靠性后,下一步就要对FBS的质量,即培养细胞的效果进行鉴定了,而这也是决定细胞能否养好的关键。
在细胞培养过程,质量粗糙的FBS可能会导致细胞出现生长速度缓慢、不贴壁、容易老化等现象,从而导致实验受阻。经过质量验证的FBS,则可以十分确定这款FBS对哪些细胞具有良好的培养效果,进而判断其能否把自己的细胞养好。对于质量优质的FBS,通常采用血清敏感性细胞(如干细胞)来进行培养验证,若培养效果良好,则其他常规细胞系的培养就更不在话下。
4. 稳定性
FBS作为其他行业的副产品,其生产在本质上会受到天气、食物供应、经济条件和牛群规模及疫情等各种因素的影响,导致血清的供应可能出现货源、价格及批次间的不稳定性,从而造成实验的不顺甚至实验失败。在过去,国内外已有多个实验室出现过因血清批间差异大而导致实验结果无法重复的情况,浪费了巨大的时间和金钱成本。
因此,找到稳定提供同批次FBS的供应商,对于确保自己细胞实验结果的真实性和可重复性具有重要意义,而且花在重复实验或检验新批次上的时间将大大减少。
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实验室操作中要注意及处理方法:
1. 血清保存: 建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而,若存放于4℃时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
2. 解冻血清的方法: 建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。
3. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?
血清中沉淀物的出现有许多种原因,但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。
若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。
4. 为什么要热灭活血清?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
5. Gemini血清有必要做热灭活吗?
实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或*没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
因此我们建议您,若非必须,您可以不需要做热处理这一步。如此一来,不但节省您宝贵的时间,更确保血清的质量!
6. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?
胎牛血清没有预老化,储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融。
7. 如何避免沉淀物的产生?
解冻Gemini血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。
解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。
血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多