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大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)活性检测ELISA试剂盒

  • 产品型号:
  • 产品时间:2017-11-07
  • 简要描述:上海慧颖生物专业供应大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)活性检测ELISA试剂盒,另供应人elisa试剂盒、大鼠elisa试剂盒、小鼠elisa试剂盒、兔elisa试剂盒等众多种属,欢迎订购大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)活性检测ELISA试剂盒,更多elisa试剂盒、检测试剂盒、elisa试剂盒说明书,正品保证,价格优惠,咨询!
  • 产品简介

中文名称:大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)ELISA试剂盒

大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)ELISA试剂盒上海慧颖——专业的elisa试剂盒供应商,本公司所有产品仅用于科研,不得用于临床,详细信息请在线咨询我公司销售人员!/!!

大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)ELISA试剂盒用途:

本试剂盒仅供科研使用,定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)的含量。

大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)ELISA试剂盒原理:

   采用双抗体夹心法测定大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)水平。用纯化的大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)抗体包被微孔板,制成固相载体,实验时依次在微孔板中加入样本及标准品,并加入HRP标记的抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,反复洗涤后加底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)含量呈正相关。采用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值),根据标准曲线,计算测试样品中大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)浓度。           

大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)ELISA试剂盒试剂盒组成

试剂盒组成

96孔配置

保存

说明书

1份

 

 

封板膜

2片(96)

 

 

密封袋

1个

 

 

酶标包被板

12孔×8条

 

 

标准品

0.6ml×1 瓶

2-8℃保存

标准品稀释液

 2ml×1 瓶

2-8℃保存

酶标试剂

6ml×1瓶

2-8℃保存

生物素标记的抗体

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

6ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

6ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

6ml×1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20ml×30倍)×1瓶

2-8℃保存


仪器与材料:酶标仪(使用前预热30分钟),微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,滤纸。实验材料与试剂配制:

2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液备用。

样品收集、处理及保存

收集标本前必须清楚要检测的成分是否足够稳定,对手机后当天进行检测的标本,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20度或者-70度条件下保存,避免反复冻融。

细胞培养上清:适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以1000×g离心15分钟,收集上清。

细胞:用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml 左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。

血清:在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。

血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20 分钟后,以1000×g离心15分钟,收集上清。

体液:包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000×g离心15分钟,收集上清。

组织标本:切取组织标本,称取重量0.5mg,加入500ul PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以2000-3000 rmp离心20 分钟,收集上清进行检测。

样品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

保存:如果样品不能立即检测,应将其分装,-70 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)elisa试剂盒操作步骤: 

取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。

分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组(6个浓度)、空白孔、待测样品组。

标准品的稀释:准备小试管6 只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul 加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0 号标准品。

注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。

加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒弃去,如此重复5 次,拍干。

加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。

温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。

洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。

显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。

终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。

读板:在450nm波长读取各孔的OD值。

注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的30分钟内,以免影响准确性。

大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)ELISA试剂盒数据计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,即为样品的实际浓度。

大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)ELISA试剂盒注意事项:

实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。

加样:加样时,要控制加样速度,避免*孔与zui后一孔间的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性。

孵育:严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。

反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。

建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。

建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。

安全性

1. 避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

2. 实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。

3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)ELISA试剂盒保存条件及有效期:

1.试剂盒保存:2-8℃

2.有效期:6个月

本公司对所有售出的产品保证质量,并提供良好的售后服务,有关产品质量的投诉,请在收到货物的30天内以书面形式提出,并向我公司技术人员提供相应的材料,我们会及时派人解决。所有形式的赔偿或退换仅限于产品本身,不涉及其他间接内容。凡购买本公司任意款elisa试剂盒,均可享受免费代测服务,并提供技术指导。

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