MDCK（NBL-2） 狗肾细胞

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产品名称：MDCK(NBL-2) 狗肾细胞

细胞简介：MDCK细胞为狗肾上皮细胞，来源于狗肾，中文名为狗肾上皮细胞，正常的细胞形态为上皮样，贴壁生长。

培养基：EMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10%

培养条件：37℃ 5% CO2

消化条件：0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA溶液，消化10-15min

传化比例：1：2-1：6

换液时间：2-3天换液一次

冻存液比例：85%培养基，10%FBS, 5% (v/v) DMSO

冻存密度：1-3 ×10^6/管，液氮保存

MDCK（NBL-2） 狗肾细胞 操作说明：

悬浮生长细胞的传代：直接直接吸去或离心后吸去培养上清液，用新鲜培养液悬浮细胞，1：3或1：5稀释细胞后，分瓶继续培养。

贴壁生长细胞的传代：吸去培养液，用PBS洗涤细胞一次，加入消化液，在37℃中消化约3～10分钟，待细胞开始脱落时，倒去消化液，加入新鲜培养液，悬浮和吹打分散细胞。也可以待细胞*消化脱落，500×g离心5分钟，去除消化液，用新鲜培养液悬浮细胞。1：3或1：5稀释细胞后，分瓶继续培养。

2）细胞株的冻存：

1． 取培养2～3天生长旺盛的细胞，用细胞培养液将细胞配成2×106～2×107/ml。

2． 在1ml细胞冻存管中加入0.5ml细胞悬液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亚砜（或甘油），混匀后密封。置4℃ 1小时，－20℃ 2小时，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上隔夜后浸入液氮中。

3）细胞株的复苏：复苏时，从液氮中取出冻存管，立即置37℃水浴中融化细胞。将细胞直接加入10ml含15％小牛血清的RPMI-1640培养液中，置37℃ 5％CO2饱和水汽二氧化碳培养箱中培养。悬浮细胞待细胞全部沉降后小心吸去上清液，更换新鲜的上述培养液，继续培养；帖壁细胞则培养2～3小时，待细胞帖壁后，倒去培养液，更换新鲜的上述培养液，继续培养。也可以在加入新鲜培养液以后，500×g离心5分钟，去上清液，加入新鲜培养液，继续培养。

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